活化培養(yǎng)的程序
打開水浴槽,確認(rèn)溫度
將冷凍管以水浴快速解凍(1~2分鐘),且
必須完全解凍(避免細(xì)胞內(nèi)冰晶反覆形成)
立 刻 將 解 凍 后 的 細(xì) 胞 液 加 至 flask(dish)
中,然后緩慢加入新鮮培養(yǎng)基(避免滲透
壓差傷害)
置于培養(yǎng)箱培養(yǎng),隔日再離心更換新鮮
培養(yǎng)基(避免剛解凍后的細(xì)胞受到離心之
物理傷害)
活化培養(yǎng)常見問題
1. 冷凍管解凍不完全。
2. 未避免滲透壓差傷害。
3. 解凍完馬上離心。(解凍完后的細(xì)胞生長勢弱,離心
使得細(xì)胞傷害更大,造成生長勢無法回復。)
96.7.1~97.7.31期間 該類反應(yīng)占總反應(yīng)之35%
活化培養(yǎng)常見問題
冷凍管解凍及培養(yǎng)基回溫的溫度須配合細(xì)胞適合生長的溫度,
否則細(xì)胞容易生長不佳。曾發(fā)生以下桉例:
1. SF9昆蟲細(xì)胞適合生長于低溫(28 ℃)環(huán)境,然而客戶解凍
該細(xì)胞時卻以37℃水溫解凍,結(jié)果日后生長狀況不佳。
2. 客戶將細(xì)胞冷凍管置于56℃水浴下解凍。
3. 冷藏于4℃下之培養(yǎng)基未加以回溫即進(jìn)行培養(yǎng)。
培養(yǎng)基相關(guān)問題
Q: 細(xì)胞培養(yǎng)資料單上建議于培養(yǎng)基中額外添加的Supplement
是否可以乎略?
例如培養(yǎng)基中已含有L-Glutamine(L-Gln),是否還要添
加?
1. L-Gln 濃度是否到達(dá)建議量。
2. 培養(yǎng)基中的L-Gln 容易分解,因此放置過久的培養(yǎng)基
必須再補(bǔ)充至足量的L-Gln。
3. 細(xì)胞是否容易受到L-Gln不足而受影響。Raw264.7細(xì)胞
容易因L-Gln 不足而分化。