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本文標(biāo)題："請(qǐng)問(wèn)HA-p53所指的HA是什么縮寫(xiě)？"

請(qǐng)問(wèn)HA-p53所指的HA是什么縮寫(xiě)？
若前方加上pcDNA 是否變?yōu)関ector？
拜託了解分子生物的知識(shí)達(dá)人解答！
如果能連同實(shí)驗(yàn)步驟.方法與運(yùn)用詳加說(shuō)明更佳，
謝謝！

HA是vector上提供的HA-tag
是vector上的一段序列
通常在vector的MCS(multiple cloning site)后面,有些tag也在前面...
基因接進(jìn)MCS中,如果基因表現(xiàn)之后,
會(huì)和基因產(chǎn)生的protein形成fusion protein...
就是說(shuō)基因產(chǎn)生的protein后面會(huì)多一段HA序列...
加上HA-tag的目的,
是為了在protein做一個(gè)標(biāo)記...
作為日后實(shí)驗(yàn)時(shí)...偵測(cè)或是純化protein時(shí)用的marker...
其他功能類(lèi)似的tag還有myc,6Xhis,V5 epitope,GST,GFP,RFP,YFP,lacz,bioluminescence ...等

HA-tag是一段九個(gè)胺基酸的序列,胺基酸序列是(YPYDVPDYA)
可以用HA-tag的antibody去偵測(cè)或是純化蛋白...
所以你的plasmid,pCDNA-HA-P53
所產(chǎn)生的protein是和HA-tag形成fusion protein的p53protein

接上這些tag的目的...當(dāng)然是為了偵測(cè)或純化protein用的
就像有些protein我們會(huì)construct在GFP的vector上...
產(chǎn)生GFP的fusion protein...
之后我們只要在螢光顯微鏡下觀(guān)察,就能知道基因的表現(xiàn)情形...
或是做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí),可用于追蹤細(xì)胞...

或是可用于大量純化protein...
例如接上GST或6XHIS...
GST是Glutathione S-transferase ,會(huì)和Glutathione結(jié)合...
6XHIS是6個(gè)histidine,可和Ni(鎳)結(jié)合...
Glutathione或Ni接上bead后,可用于純化這種protein...

你的p53protein 形成的HA-tag fusion protein
當(dāng)你做細(xì)胞染色時(shí),可用HA-tag antibody來(lái)偵測(cè)p53的表現(xiàn)情形...
或是如果要做protein-protein interaction 方面的實(shí)驗(yàn),如免疫沉淀...
因?yàn)楫?dāng)使用p53 antibody時(shí),antibody接上p53 protein 時(shí),
p53 protein有可能會(huì)發(fā)生結(jié)構(gòu)改變,
或是和其他protein interaction的位置被antibody擋住...
可能使protein失去和其他protein interaction的能力
所以或做一個(gè)HA-tag fusion protein...
再用HA-tag的antibody去認(rèn)fusion protein的HA-tag...
這樣就不會(huì)因?yàn)榻由蟖ntibody發(fā)生結(jié)構(gòu)改變,
或是和其他protein interaction的位置被antibody擋住的情形發(fā)生...