用低倍顯微鏡觀察支原體
用低倍顯微鏡觀察,可見典型菌落呈現(xiàn)特殊的“荷包蛋”狀
支原體(Mycoplasma)是另一類原核細胞型微生物,是能在人工培養(yǎng)基上生長的最小微生物。廣泛存在于自然界,動物、人體中都有支原體存在。有些是正常寄生菌,有些菌株能使動物和人生病,最早發(fā)現(xiàn)的支原體就是從牛傳染性胸膜炎的標(biāo)本中分離出來的。有些與植物病害有關(guān)。
支原體缺乏細胞壁,只有可變形的細胞膜,因此支原體呈明顯的多形態(tài),有球狀、絲狀、桿狀、顆粒狀及各種不規(guī)則形態(tài),最小的只200nm,大的可達5Nl0um,有的長絲可達150um。
電鏡下可見細胞膜由三層組成,外層和內(nèi)層是蛋白質(zhì),中層為類脂及膽固醇,胞質(zhì)中有大量核蛋白體,核酸有DNA及RNA兩種,DNA呈不規(guī)則絲狀排列。革蘭染色陰性,但不易著色,常用Giemsa染色,呈澹紫色。
支原體可人工培養(yǎng),營養(yǎng)要求高,需加血清、酵母浸液,多數(shù)還需膽固醇。需氧或兼性厭氧,有些在初次培養(yǎng)時還需CO2及N2,pH7.6~8.0,37°C、濕度較高的環(huán)境下容易生長。
支原體行二分裂繁殖,但還有其他方式,球形顆�?稍龃蠡蜓娱L,形成多個小顆粒,然后將小顆粒放出,有的還能出芽或分枝。支原體生長緩慢,3~4h才繁殖一次。初次分離需一周以上才能看到。支原體在液體培養(yǎng)基中生長后輕度溷濁,小顆粒樣生長或薄片集落粘附管壁;在固體培養(yǎng)基上2~4d后出現(xiàn)微小的菌落,直徑0.5mm左右,小的只有10~15um,菌落圓形,邊緣整齊扁平,透明,中央不透明,常長入培養(yǎng)基中,用低倍顯微鏡觀察,可見典型菌落呈現(xiàn)特殊的“荷包蛋”狀。支原體有些株可在雞胚尿囊腔中生長,有些在細胞培養(yǎng)中生長而引起病變,有些則不出現(xiàn)病變。
用吸有抗體的濾紙片覆蓋于培養(yǎng)支原體的平皿上,可見相應(yīng)血清型的支原體生長被抑制,以此可鑑定支原體及其型別。
支原體對溫度抵抗力弱,45°C30min死亡,對影響膽固醇的肥皂、酒精等敏感,對其他表面活性物質(zhì)和脂溶劑都很敏感,對煤酚皂也比細菌敏感。對青霉素、多粘菌素、結(jié)晶紫等不敏感,而對紅霉素、四環(huán)素、土霉素、氯霉素等敏感。
人體寄生的支原體:
從人體發(fā)現(xiàn)的支原體有人型支原體、唾液支原體、口腔I、II.III型支原體、發(fā)酵型支原體、肺炎支原體、T株支原體八種。
曾經(jīng)認為非典型肺炎由病毒引起,現(xiàn)已肯定其病原體是肺炎支原體。經(jīng)呼吸道傳播,可散發(fā)和小流行。肺炎支原體可吸附于氣管上皮細胞表面具有神經(jīng)氨酸為末端的糖蛋白受體上,感染后經(jīng)2~5周潛伏期而發(fā)病,病情輕重不一,重者可引起肺部間質(zhì)性肺炎伴細支氣管炎,有發(fā)熱、頭痛、咳嗽等癥狀。
取患者痰或鼻咽拭子接種在含血清的培養(yǎng)基中以分離支原體,用免疫熒光法及抗體抑制生長試驗進行鑑定。感染后人的血清中可出現(xiàn)具有保護性的抗體,血清中還有冷凝集素,可取患者血清與人的O型紅細胞在4°C做冷凝集試驗。有些病人可出現(xiàn)對MG甲型鏈球菌的抗體,取血清和MG鏈球菌做凝集試驗,陽性者可作輔助診斷。
呼吸道分泌液中的IgA能阻止肺炎支原體吸附于粘膜上皮細胞,肺泡中的巨噬細胞及致敏T淋巴細胞在免疫中也起作用。病后免疫力不牢固,可重復(fù)感染。四環(huán)素、紅霉素對非典型肺炎有療效。
肺炎支原體也可從慢性氣管炎病人的痰中分離到。人型支原體和T株(微小株)支原體等雖然可以從泌尿生殖道炎癥,以及咽炎、結(jié)膜炎、關(guān)節(jié)炎等病變材料中分離出來,但由于在正常人體也能發(fā)現(xiàn),故其致病作用不能肯定