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本文標題："蛋白質的抽提, 純化與計量?"

蛋白質的抽提, 純化與計量

測蛋白質之量：

Bradford法：

利用染劑Coomassie Brilliant Blue會與蛋白質結合的性質, 再與已知蛋白質濃度之標準曲線比較, 而估計蛋白質之量.

材料：

0.5mg/ml bovine serum albumin（BSA）

0.15M NaCl

Coomassie Brilliant Blue 液

實驗步驟：

1. 在4支微量管中, 分別放入0.5mg/ml BSA液5, 10, 15, 20μl再以0.15M NaCl液加入使達總體積100μl再以1支微量管加入100μl之0.15M NaCl, 此為控制組.

2. 在每試管中加入1ml之Coomassie Brilliant Blue液, 并充分溷合, 置室溫2分鐘.

3. 以光譜儀測A595, 訂出標準曲線, 再測未知濃度液, 已查出其濃度. 但若未知液濃度太大, 可稀釋后再測.

附注：

1. Coomassie Brilliant Blue液製法：以一個1公升的錐形瓶, 溶解100mg之Coomassie Brilliant Blue G-250于50ml之95﹪酒精中, 再加100ml的85﹪phosphoric acid液, 再加入dH2O使達1,000ml, 再以濾紙過濾, 并保存在4℃中備用.

2. 甘油, 洗潔精, 2-mercaptoethanol, acetic acid, ammonium sulfate, Tris等均會影響測定結果.