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細(xì)胞毒理實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)報(bào)告
1.實(shí)驗(yàn)原理
a.觀察細(xì)胞培養(yǎng)在有害物質(zhì)下,分別觀察三十分鐘(短期毒理) ,和二十四小時(shí)(長(zhǎng)期毒理)的細(xì)胞生長(zhǎng)和死亡狀況。
b.藉由觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,推算出在不同濃度下的死亡率。
c.本次實(shí)驗(yàn)使用malachite green做為毒性物質(zhì),一般而言malachite green對(duì)生物體是有害的。
d.先求得malachite green對(duì)HeLa細(xì)胞在三十分鐘培養(yǎng)下的LD50值,再取此值的百分之五十的濃度做為長(zhǎng)期毒理實(shí)驗(yàn)濃度。
2.實(shí)驗(yàn)方法
a.配制不同濃度的malachite green,加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)三十分鐘后,計(jì)算細(xì)胞死亡率,求得LD50值。
b.取三十分鐘的LD50值濃度的百分之五十做為長(zhǎng)期毒理實(shí)驗(yàn)濃度,加入細(xì)胞培養(yǎng)皿中,觀察二十四小時(shí)后的存活率,并找出讓HeLa全死所需最低濃度,以及HeLa完全不死所能忍受的最高
濃度。
3.結(jié)果
a.malachite green對(duì)HeLa細(xì)胞的三十分鐘短期毒性LD50值約為1*10-4M,見(jiàn)Table.1
b.使用5*10-5M的malachite green做為二十四小時(shí)長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn),細(xì)胞死亡率為33.7%,見(jiàn)Table. 2
c.使用不同濃度的malachite green測(cè)試HeLa全死所需最低濃度,以及HeLa完全不死所能忍受的最高濃度:
(i) HeLa全死所需最低濃度: 1.5*10-4M
(ii) HeLa完全不死所能忍受的最高濃度: 1*10-7M
4.討論
a.從實(shí)驗(yàn)結(jié)果看來(lái)malachite green對(duì)HeLa毒性并不高。
b.當(dāng)加入低濃度malachite green,如1*10-7M,培養(yǎng)二十四小時(shí)后發(fā)現(xiàn)malachite green的綠色轉(zhuǎn)為無(wú)色,推測(cè)細(xì)胞有辦法抵御低濃度的malachite green,避免細(xì)胞受到傷害。
c.由Table可以看到細(xì)胞死亡率和malachite green濃度并沒(méi)有呈倍數(shù)關(guān)系,表示毒物必須累積到一定的濃度才會(huì)對(duì)細(xì)胞造成傷害。
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