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本文標(biāo)題："植物病毒診斷之酵素連結(jié)抗體法！顯微鏡-金相顯微鏡專(zhuān)賣(mài)！"

 酵素連結(jié)抗體法(ELISA=Enzyme linked immunosorbent assay)：
首先將抗血清中之主要抗體 IgG 純化出來(lái)，利用戊二醛本身所具的醛基容
易和氨基發(fā)生連結(jié)的性質(zhì)形成酵素連結(jié)抗體，或利用過(guò)碘酸鈉先將含有五碳糖
酵素氧化形成醛基后再和抗體的氨基連接形成酵素連結(jié)抗體，或?qū)⒓兓�后的�?br />體 IgG 先以胃蛋白酵素分解去除抗體 Fc 非特異附著部位后，所得抗體(Fab’)2
片段所持有的-SH 基，再利用馬來(lái)醯亞胺或二硫化吡啶基和含有-SH 基的酵素
連結(jié)而得到酵素連結(jié)抗體。利用 ELISA 診斷有許多檢查的方法，在偵測(cè)已未經(jīng)
純化之材料為被檢體時(shí)，常用的基本檢查法是雙抗體包夾法(Double antibody
sandwich ELISA)最為普遍，其檢查過(guò)程簡(jiǎn)述如下：
1 首先將已知抗體吸附在 96 穴檢查盤(pán)
37 ℃下反應(yīng) 1-2 hr 或室溫反應(yīng) 4-6 小時(shí)或 4 ℃下隔夜
↓
2
以洗滌液洗滌后
↓
3
各穴放入各種被檢體，
37 ℃下反應(yīng) 1-2 hr 或室溫反應(yīng) 4-6 小時(shí)或 4 ℃下隔夜
↓
4
再以洗滌液洗滌
↓
5
各穴加入稀釋后的酵素連結(jié)抗體，
37 ℃下反應(yīng) 1-2 hr 或室溫反應(yīng) 4-6 小時(shí)或 4 ℃下隔夜
↓
6
再以洗滌液洗滌
↓
7
加入酵素基質(zhì)，室溫下反應(yīng) 15-60 分鐘
↓
反應(yīng)完全后，加入 3 N 的 NaOH 溶液停止反應(yīng)
若被檢體內(nèi)有抗原(病原)存在，雖然以肉眼無(wú)法觀察到的微弱抗體抗原反應(yīng)發(fā)
生，由于抗體上連有酵素，而酵素遇到其基質(zhì)則會(huì)反應(yīng)呈色的原理，也就容易用肉
眼從酵素的呈色而得知有抗原(病原)的存在。
上述過(guò)程中之酵素連結(jié)抗體，係連結(jié)在一次抗體上，若連結(jié)在二次抗體(即以兔子
免疫注射而來(lái)之抗體為抗原，再免疫注射至不同動(dòng)物如羊所產(chǎn)生之抗體謂之二次抗
體)上，則所得之酵素連結(jié)抗體，以后檢查時(shí)只要是由兔子而來(lái)之不同種類(lèi)抗血清，
該連結(jié)抗體皆可共用。需要檢查的病毒種類(lèi)多時(shí)較方便，有人稱(chēng)之謂 Indirect
ELISA，惟靈敏度及特異性反應(yīng)較連結(jié)在一次抗體的 Direct ELISA 為低。

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