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本文標(biāo)題："GUS分析測(cè)量每個(gè)時(shí)間點(diǎn)其405奈米的吸光值"

GUS Assay
1. 于冰上解凍細(xì)胞溶解物
2. 新鮮製備GUS分析緩沖液并預(yù)溫至37°C
3. 準(zhǔn)備可棄式比色管 (至少每個(gè)測(cè)試三管) ，每管加入800微升 0.4M碳酸鈉 (反應(yīng)終止溶液)
4. 每個(gè)樣本準(zhǔn)備一2ml含800微升如上述之GUS分析緩沖液的微量離心管。加入200微升細(xì)胞溶解物 (這使得PNPG終濃度為1mM) 記錄時(shí)間
5. 將反應(yīng)置于37°C并記錄時(shí)間 (注: 使用恆溫水槽是較好的，但一致性是要點(diǎn)) 。注意黃色的產(chǎn)生 (p-nitrophenol)。于不少于三個(gè)時(shí)間點(diǎn) (如15、30、45分)
 由每個(gè)樣本取出100微升置于比色管 (當(dāng)分析粗製的細(xì)胞溶解溷合液時(shí)，將反應(yīng)試管離心取100微升上清液置于比色管) 。將反應(yīng)試管短暫的漩渦式震盪后，
迅速至回37°C。時(shí)間點(diǎn)無(wú)須等間隔，但一定要記錄時(shí)間。
6. 測(cè)量每個(gè)時(shí)間點(diǎn)其405奈米的吸光值對(duì)比于終止之空白反應(yīng) (注: 形成的顏色于終止溶液中是穩(wěn)定的；
如果你同時(shí)測(cè)量所有時(shí)間點(diǎn)的反應(yīng)而非再每個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)量時(shí)，會(huì)有少許誤差)