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本文標(biāo)題："快速鑒定腸道桿菌科細(xì)菌及其他革蘭氏陰性菌！"
細(xì)菌快速鑒定方法
一、目的
應(yīng)用迷你多項(xiàng)生化檢測系統(tǒng)（miniaturized multi-test systems）快速鑑定細(xì)菌。
本試驗(yàn)以 API 20E 簡易鑑定套組為例，鑑定腸道桿菌科細(xì)菌及其他革蘭氏陰性菌。
二、原理
API 20E 套組有 20 個小管，內(nèi)含特定的乾燥基質(zhì)，可進(jìn)行 23 種生化試驗(yàn)之判
讀。各項(xiàng)生化試驗(yàn)依判讀標(biāo)準(zhǔn)表判讀及記錄，再計(jì)算出 7－9 個數(shù)字之菌碼
（profile
number）
，最后應(yīng)用菌碼索引（analytic profile index）查出該菌碼所對應(yīng)之細(xì)菌菌
名，即為待測細(xì)菌之菌種名稱。
三、材料與設(shè)備
(一) 材料
1. 培養(yǎng)18-24小時(shí)之純化Klebsiella pneumoniae
2. API 20E 細(xì)菌快速鑑定套組。
(二) 設(shè)備
1. 培養(yǎng)箱
四、方法與步驟
1. 將待測細(xì)菌進(jìn)行氧化 （oxidase）試驗(yàn)，確定為陰性反應(yīng)后再進(jìn)行以下試
驗(yàn)。
2. 加 5 ml 水至培養(yǎng)托盤內(nèi)之孔洞中，以保持盒內(nèi)之濕度，并在盤上進(jìn)行標(biāo)示。
3. 取出 API 20E 快速鑑定套組并置入培養(yǎng)托盤內(nèi)。
4. 加 5 ml 之無菌蒸餾水至無菌試管內(nèi)。
5. 挑取 1-2 個純化之菌落并懸浮至無菌蒸餾水中。
6. 于各試驗(yàn)孔之管中 (tube) 加滿菌液。
7. 在 CIT, VP 及 GEL 試驗(yàn)孔之管頭 (cupule) 加滿菌液。
8. 在 ADH、LDC、ODC、H2S、URE 試驗(yàn)孔上加入無菌礦物油。
9. 蓋上培養(yǎng)蓋，于 37℃培養(yǎng) 18~24 小時(shí)后進(jìn)行判讀。
10. 先將不需加加入試劑即可判讀之各項(xiàng)試驗(yàn)進(jìn)行判讀 (參考判讀表) 并記
錄。
1) 若 GLU 呈陽性及／或 3 個以上試驗(yàn)呈現(xiàn)陽性則在以下試驗(yàn)孔加入試劑后
判讀：
TDA 試驗(yàn) – 在 TDA 試驗(yàn)孔加入一滴 TDA 試劑后即可判讀；
IND 試驗(yàn) -- 在 IND 試驗(yàn)孔加入一滴 James 試劑后判讀；
VP 試驗(yàn) -- VP 試驗(yàn)孔加入 VP1 及 VP2 試劑各一滴，10 分鐘后判讀；
NO2 還原試驗(yàn) -- 在 GLU 試驗(yàn)孔加入 NIT1 及 NIT2 試劑各一滴，2~3
分鐘后判讀。若為陰性反應(yīng) (黃色) 則加入 2-3 mg 鋅粉，5 分鐘后若仍
呈黃色則為陽性反應(yīng)，若呈紅色則為陰性反應(yīng)。
2) 若 GLU 為陰性且其他反應(yīng)呈陽性者少于２個，則將 API 套組再培養(yǎng) 24小時(shí)后如同上述加入各種試劑并進(jìn)行判讀。