蒲葵; 內(nèi)生棲生菌; 核糖體核糖核酸; 聚合酵素連鎖反應(yīng); 親緣關(guān)系 

內(nèi)生真菌是指在其生活史中的某一段時期生活在植物組織內(nèi)，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。內(nèi)生真菌研究是近二十年來比較活躍的新領(lǐng)域，它豐富了我們對真菌生物多樣性的認識。目前，內(nèi)生真菌研究的基本步驟為：植物組織的表面消毒，在營養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)植物組織，內(nèi)生真菌的分離和純化，根據(jù)經(jīng)典形態(tài)學方法鑑定菌種。在此研究過程中，即使我們用不同的營養(yǎng)培養(yǎng)基和在不同的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)植物組織，也不能保證所有生活在植物組織內(nèi)的真菌全被分離出來，可能有的內(nèi)生真菌不能在人工培養(yǎng)基上生長；另外，雖然在分離營養(yǎng)培養(yǎng)基中加入一些抑制真菌增長的化學物質(zhì)，但是還是有一些生長緩慢的真菌常被生長快的真菌所覆蓋，同樣很難分離到這類生長緩慢的真菌。為了克服現(xiàn)行經(jīng)典研究方法帶來的缺陷，我們用分子生物學技術(shù)直接從植物組織內(nèi)檢測和鑑定內(nèi)生真菌。健康的蒲葵樹葉經(jīng)過表面消毒后，用CTAB法提取總DNA，然后用PCR擴增 rDNA的ITS（ITS1, 5.8S, ITS2）片段，將PCR產(chǎn)物選殖到pGEM上，測定選殖的堿基序列