地黃的顯微鏡鏡檢研究

藥材

(1)鮮地黃—2001年 11月分別自河南懷慶藥農(nóng)及北京藥用植物資源研究所取得剛采收之一年地黃根，冷凍保存。

(2)乾地黃—2001 年 11 月取自河南懷慶，為鮮地黃切厚片后經(jīng)烘乾。

(3)地黃炮制品—?jiǎng)俨�藥廠提供生地（乾生地，不捏成團(tuán)塊）及熟地，冷藏保存�！�三批地黃一曬及九曬檢品，冷藏保存。

2.試藥及溶媒95% Ethanol、冷凍切片用冷媒（PEG 及 PG）、Paraffin、蛋白黏著劑、Xylene、Anhydrous Ethanol、75% Ethanol、50%Ethanol、Water、HematoxylinSolution、Eosine Solution、Safranin O Solution（1% in 50% Ethanol）、1%Hydrochloric acid in 50% Ethanol、Fast Green FCF Solution（0.5% inAnhydrous Ethanol）、Sudan III Solution（Saturated in 95% Ethanol）、Acacia-Sugar Solution、Canada Balsam-Xylene Solution、Glycerin-WaterSolution（1：1）

3.儀器設(shè)備

(1)電子天平—“Sartorius” BP190S

(2)冷凍切片機(jī)

(3)滑動式切片機(jī)

(4)染色槽
(5)顯微鏡及照相裝置

(6)磨粉機(jī)

二、

方法 

1.鮮地黃、乾地黃及地黃炮制品之基原鑑定鮮地黃（北京、懷慶）、勝昌生地、勝昌熟地、第三批一曬及九曬地黃橫切根部中段厚片（均 0.5 公分）。

鮮地黃以石蠟包埋切片法及徒手切

片法，地黃炮制品以冷凍切片法進(jìn)行組織切片。

(1)石蠟包埋切片法檢品經(jīng)以下步驟依序操作后，

鏡檢觀察地黃特征：栓皮細(xì)胞、分泌細(xì)胞、維管束及導(dǎo)管。A.固定將類圓形橫斷面依軸心半徑性縱切為 4~5 片，分別放入鏤空有蓋之小盒內(nèi)，浸于固定液（Anhydrous Ethanol）1~2 日。B.滲蠟、埋蠟C.切片蠟塊以滑動式切片機(jī)切片，切好之薄片置于水中伸展開。D.張貼切片載玻片上滴蛋白黏著劑，涂開。將此載玻片撈起薄片，烘乾至完全乾燥。E.染色脫水及封片a. Hematoxylin-Eosine 染色法（細(xì)胞壁呈紅色，核呈紫色）切片浸于Xylene中10~15分鐘以溶去Paraffin，再浸于AnhydrousEthanol 10~15 分鐘以溶去 Xylene。滴加Hematoxylin Solution 1~2分鐘，移至水中，水洗。滴加 Eosine Solution，再移至水中，水洗，完成染色。切片依序浸于 50% Ethanol、75% Ethanol、95% Ethanol、AnhydrousEthanol 及 Xylene 各約 1 小時(shí)以脫水。已脫水之切片滴加 Canada Balsam-Xylene solution，加蓋玻片，靜置過夜，完成封片；也可將未脫水之切片滴加Acacia-sugar solution封片。b. Safranin-Fast Green染色法（木栓化及木質(zhì)化細(xì)胞壁呈紅色，其他呈綠色）切片同 a法溶去 Xylene 后依序浸于95%Ethanol、75% Ethanol 各約 10~15 分鐘。切片浸于Safranin O solution過夜（16 小時(shí)以上）