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本文標題："地黃炮制前后其他藥理活性之比較!抗腫瘤細胞生長活性"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2012-3-29 1:26:31 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
地黃炮制前后其他藥理活性之比較
一、材料
本研究制備之三批一五九蒸曬熟地黃重慶行生地沅方生地沅
方九蒸曬熟地黃。
二、實驗方法
1.抗腫瘤細胞生長活性
本實驗將探用兩種癌細胞株（肝胞細胞Hep 3B，前列腺癌細胞PC 3）來
評估其地黃炮制前、中、后各分畫之抗癌活性。細胞數(shù)目將MTT以法來測定，
同時為了區(qū)別是否為直接細胞毒性，將測定Lactate dehydrogenase (LDH)以茲區(qū)
別。
2.抗氧化、自由基清除活性
DDPH為一穩(wěn)定氮屬自由基，其517 nm吸光值約為1.12。當測試成分具
有自由基清除能力時，吸光值會明顯地下降。而評估測試成分清除自由基能力
的依據(jù)是30分鐘內(nèi)使吸光值517 nm降低0.20單位時其所需之濃度（IC 0.20）表
示之。
3.抗血小板凝集活性
以EDTA 當抗凝血劑來制備富血小板血漿(Platelet-rich plasma, PRP)，以本
實驗室發(fā)表之方法來洗滌，并制成血小板懸濁液(platelet suspension)。在各種不
同之引發(fā)劑（如ADP, collagen, thrombin, Platelet-activating factor），以混濁度法
來測定血小板凝集之程度。
4.纖維蛋白溶解作用
上述之血漿加入地黃抽取物后，以凝血產(chǎn)生凝血后，觀察血塊溶解之時
間，以判斷是否可縮短纖溶時間。
5.血管平滑肌之增生
將自大鼠胸腔取出血管，剪碎培養(yǎng)，并以trypsin將細胞打下，進行續(xù)代培
養(yǎng)到第三到第八代。地黃之抽取物在與血管平滑細胞存在下，以各種增生劑（10
% FBS, PDGF, thrombin），經(jīng)48 小時后，以MTT 法測定細胞數(shù)目。
6.對骨髓造血系統(tǒng)之影響
(1)血液學研究
第一批一蒸曬之地黃抽出液以1g/kg及5g/kg 口服灌食ICR小鼠，每組各
5 只，另取5 只只灌食0.5ml 生理食鹽水做為對照。灌食后6、12、24 小時從
尾靜脈采血做涂抹片，經(jīng)Wright 染色液染色后,以油鏡觀察，并計算嗜中性球、
嗜酸性球、嗜堿性球與淋巴球之數(shù)值
(2)股骨骨髓細胞學
第一批一蒸曬之地黃抽出液以1g/kg及5g/kg 口服灌食ICR小鼠，每組各
5 只，另取5只只灌食0.5ml 生理食鹽水做為對照。灌食后12 小時，將ICR小
鼠以dislocation方法安樂死，迅速取出股骨，其中之骨髓以冰過之Hank's Buffer
Solution(HSS)沖出，經(jīng)離心(230xg 10mim)洗滌后，以0.5ml HSS 溶出，做成涂
抹片，以冰醋酸固定處理，染色后用顯微鏡觀察。
7.對免疫系統(tǒng)之影響
第一批、第二批及沅方九蒸曬地黃水抽出液，分別以25mg/kg與250mg/kg
二種濃度注射于ICR小鼠腹腔，連續(xù)五天，每一濃度使用10 只ICR小鼠。實
驗前及地黃抽出液注射后第5天和第8天，所有ICR小鼠先由尾靜脈采血，放
置4℃使其凝固，經(jīng)離心取上清液，保存于-70℃冰箱待測。以R&D 公司之
Quantikine
®
M 測定ICR 小鼠注射地黃抽出液后血中Iinterleukin-4 及
Interleukin-12 的變化。注射25mg/kg者每組取4只，250mg/kg者每組取5 只做
測定。
(1)Lymphoproliferation assay：動物安樂死后，在無菌箱取出脾臟細胞洗
滌后，置于含10 %胎牛血清之RPMI 1640 培養(yǎng)液后，分注于培養(yǎng)皿。
在37°C培養(yǎng)48小時后，加入3
H thymidine，再經(jīng)18小時后，收取細
胞做放射性計數(shù)。
(2)Total immunoglobulin assay：以ELISA Test Kit 測定。
(3)Cytokines assay：Interleukin(IL)-1、IL-2、IL-12 等，以ELISA Test Kit
測定。
結(jié)果與討論
(一)在抗癌活性分析方面：
以人類前列腺腫瘤細胞(PC-3)及人類肝腫瘤細胞(HA22T)來作實驗，結(jié)果
發(fā)現(xiàn)生地黃及一至九蒸曬地黃對于PC-3（附件四圖一）都沒有任何毒殺能力；
對于肝腫瘤細胞（附件四圖二）的毒殺作用，則發(fā)現(xiàn)第二批五蒸曬之地黃、第
三批一蒸曬地黃及重慶行生地黃有少許的腫瘤細胞毒殺作用，但作用太小，真
實意義不大。此外，若細胞培養(yǎng)液中含有10%胎牛血清，則上述作用即消失，
其解釋原因為：1.可能是實驗中有誤差值，因?qū)嶒炛蹈淖儾淮�，故少許的誤差
即造成統(tǒng)計上沒有意義了；2. 有可能地黃成分與血漿蛋白結(jié)合，使其作用消失
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