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本文標(biāo)題："仙人掌桿菌實(shí)驗(yàn)使用藥品樣品與培養(yǎng)基"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2012-4-12 16:55:28 本站主頁(yè)地址：http://www.y7853.cn
仙人掌桿菌實(shí)驗(yàn)使用藥品樣品與培養(yǎng)基
(一)培養(yǎng)基
1.甘露糖醇-蛋黃-多黏桿菌素(洋菜)培養(yǎng)基(Mannitol-Egg yolk-Polymyxin agar，簡(jiǎn)稱MYP agar)
牛肉抽出物(Beef extract) 1g 蛋白凍(Peptone) 10g
D-甘露糖醇(D-Mannitol) 10g 氯化鈉(NaCl) 10g
酚紅(Phenol red) 0.025g 洋菜(Agar) 15g
蒸餾水(Distilled water) 900m l
加熱溶解后，以121℃滅菌15分鐘，最后pH值為6.8±0.2，冷卻至50℃ ，加入50m l無(wú)菌之蛋黃液(a)及每ml含1萬(wàn)單位的多黏桿菌素B硫酸鹽( Polymyxin B sulfate)溶液10m l(b)。 培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿前，應(yīng)搖動(dòng)溷合，使絮狀沉淀物分散均勻，搖動(dòng)時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
(a)蛋黃液之配制:雞蛋洗凈，浸入0.1%氯化汞溶液1小時(shí)，再浸入70%乙醇溶液中30分鐘，取出蛋黃加入等量
之無(wú)菌生理食鹽水。
(b)每ml含1萬(wàn)單位多黏桿菌素B硫酸鹽溶液之配制:取50萬(wàn)單位多黏桿菌素B硫酸鹽，溶于33.3m l蒸餾水后，
再以具有0.45um孔徑濾膜做無(wú)菌過(guò)濾。
2.胰化酪蛋白-大豆-多黏桿菌素培養(yǎng)液(Trypticase-Soy-Polymyxin Broth，簡(jiǎn)稱TSB):同葡萄狀球菌實(shí)驗(yàn)
3.營(yíng)養(yǎng)洋菜培養(yǎng)基(Nutrient agar):同E.coli實(shí)驗(yàn)
4.營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基(Nutrient broth):同E.coli實(shí)驗(yàn)
5.酚紅葡萄糖培養(yǎng)液(Phenol red glucose broth):同金黃色葡萄狀球菌實(shí)驗(yàn)
6.硝酸鹽培養(yǎng)基(Nitrate broth)
(二)藥品:
1.亞硝酸鹽試驗(yàn):A solution: 1g對(duì)-胺基苯璜酸(Sulfonilic acid)溶于125m l之5N醋酸(acetic acid)中。
B solution: 1g α - 柰酚( α -naphthol) 溶于200m l之5N醋酸(acetic acid)中。
2.碘試劑: 1g KI溶于5ml蒸餾水;加0.5gI2完全溶解后再加蒸餾水成100ml。
樣品及培養(yǎng)基 接種日期 備注
1.樣品+ 225m l稀釋液 第一天( / ) 225m l裝入刀口瓶
2.9m l稀釋液， 1m l定量吸管，L型玻棒 " 每組四個(gè)試管
3.TSB平板(注1) 每組兩個(gè)平板
4.MYP平板(注2)
5.NA斜面培養(yǎng)基 第二天( / ) 每組兩個(gè)試管
6革蘭氏染色與鏡檢 第三天( / )
7. H2O2(3%)
8.Phenol red glucose broth+石蠟每組兩個(gè)試管
9.硝酸鹽Borth(Nitrate broth)
10.石蕊牛乳(Litmus milk)
11.營(yíng)養(yǎng)明膠(Nutri ent gelatin)
12.淀粉培養(yǎng)基(Starch agar)
13.MR-VP培養(yǎng)基
14.血液培養(yǎng)基(Blood agar)
15.酚紅糖類培養(yǎng)基
Phenol red mannitol broth
Phenol red sucrose broth
Phenol red salicin broth
Phenol red glycerol broth 每種兩個(gè)試管
16.亞硝酸鹽試驗(yàn) 第四天( / ) A﹑B試劑各加0.5m l
17.碘試劑 第五天( / ) 加入Starch agar
18.VP試劑 第五天( / ) 加入VP medium
19.溶菌素耐性試驗(yàn) 第五天( / )
注1與注2:培養(yǎng)基殺菌后，冷卻到50℃后，每0.9L加入100m l無(wú)菌蛋黃液及1m l含10萬(wàn)單位的多黏菌數(shù)硫酸鹽(polymyxin B sulfate)，培養(yǎng)基倒平板前需搖動(dòng)溷合均勻，但搖動(dòng)時(shí)不可產(chǎn)生氣泡。
注3:亞硝酸鹽試驗(yàn):A solution: 1g對(duì)-胺基苯璜酸(Sulfonilic acid)溶于125m l之5N醋酸(acetic acid)中。 B.solution: 1g α- 柰酚( α-naphthol) 溶于200m l之5N醋酸(acetic acid)中。
注4:碘試劑: 1g KI溶于5m l蒸餾水;加0.5g I2完全溶解后再加蒸餾水成100m l。
四﹑仙人掌桿菌在各培養(yǎng)基上之典型菌落與反應(yīng)
樣品及培養(yǎng)基 培養(yǎng)基之作用 典型菌落與反應(yīng)
1.樣品+ 225m l稀釋液
2.9m l稀釋液， 1m l定量吸管等
3.TSB平板 分離﹑篩選及計(jì)數(shù)圓形﹑扁平﹑干燥﹑呈毛玻璃狀﹑半透明到乳白
4.MYP平板
5.NA斜面培養(yǎng)基 培養(yǎng)菌種供做生化試驗(yàn)
6.格蘭氏染色與鏡檢 G(+)﹑桿菌﹑兩端方形(長(zhǎng)或短鏈狀)﹑孢子橢圓
7.H2O2(3%) Catalase test 產(chǎn)生氣泡(+)
8.Phenol red glucose broth 嫌氣發(fā)酵glucose 黃色(+)
9.硝酸鹽Borth(Nitrate broth) 代謝Nitrate 紅色(+)
10.石蕊牛乳(Litmus milk) 分解蛋白質(zhì) 澄清(+)
11.營(yíng)養(yǎng)明膠(Nutrient gelatin) 分解明膠 不凝固(+)
12.淀粉培養(yǎng)基(Starch agar) 明膠淀粉 透明圈(+)
13.MR-VP培養(yǎng)基 VP反應(yīng) VP反應(yīng)無(wú)顏色反應(yīng)(-)
14.血液培養(yǎng)基(Blood agar) 血反應(yīng) 透明環(huán)(+)
15.酚紅糖類培養(yǎng)基 糖利用試驗(yàn)
Phenol red mannitol broth mannitol 紅色(-)
Phenol red sucrose broth sucrose 黃色(+)
Phenol red salicin broth salicin salicin黃色(+)
Phenol red glycerol broth glycerol 黃色(+)
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