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本文標題："廣視域多光子激發(fā)螢光顯微技術！一臺顯微鏡多少錢"

              利用同時空間與時間聚焦(simultaneouslyspatialandtemporalfocusing)技術的廣視域多光子激發(fā)螢光顯微技術(widefieldmultiphotonexcitedfluorescencemicroscopy)有機會快速提供活體生物組織的三維(three-dimensional，3D)多光子螢光影像。不同于一般傳統(tǒng)式的多光子螢光顯微術需要逐點掃描，廣視域多光子顯微技術僅需要掃描一個軸向，也就是z軸，藉此去建構一個3D影像。本論文利用Ti:sapphire飛秒雷射振盪器(femtosecondlaseroscillator)當作飛秒雷射放大器(femtosecondlaseramplifier)的根本光源(seedingsource)，輸出的120fs脈衝雷射其重覆率(repetitionrate)為10kHz，也將原先的脈衝雷射之能量提升至4.2瓦，而這樣的瞬間極大能量足夠去激發(fā)大于100x100μm2面積的多光子螢光信號。此外，軸向的解析度可以到達5μm以下，再利用冷卻式電子倍增感光耦合器(electronmultiplyingchargecoupledevice，EMCCD)照相機來擷取螢光影像信號，其幀速率(framerate)依照不同螢光團分子的放出效率而有不同的值，其最高可達數(shù)百Hz。因此具有此飛秒雷射放大器與低溫EMCCD照相機的協(xié)助，此廣域多光子顯微技術可以提供非常快速擷取活體生物影像，例如可以即時動態(tài)觀測腦部神經(jīng)細胞的活動以及肝臟的代謝等。目前此系統(tǒng)的縱向解析度可達將近2.5μm，也利用量測微米螢光球來推估其側向解析度達500nm以下。另外，成功地針對腦神經(jīng)細胞組織進行多光子螢光3D影像重建，目前使用EMCCD全范圍1000x1000的像素其幀速度最快可達20Hz。