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酵母菌初始細胞數(shù)對增生試驗的影響
1.于15 mL離心管中加入3mL培養(yǎng)液(SD medium-His)，自培養(yǎng)皿上刮取少許酵母菌加入培養(yǎng)液中，混合均勻，置于軌道震盪器上培養(yǎng)隔夜。
2.實驗之前，先用70%酒精清潔無菌操作臺，將風扇打開，使其運轉(zhuǎn)約30分鐘后，然后用70%酒精擦拭一次，再開始實驗操作。
3.將雌二醇及乙基雌二醇，涵蓋5, 1, 0.5, 0.2, 0.1, 0.05 ppb七個濃度及一個空白試驗，三重複。故取標準品0.05 g，用50mL無水酒精稀釋為1000 ppm stock solution，連續(xù)10倍稀釋，得100 , 10, 1 ppm。
- 取1 ppm 標準液10 m L至96孔盤，至乾，爾后加上200 m L 酵母菌液即得5 ppb標準液測試。
5.取100 m L菌液加上900 m L SD-His-Ura 之培養(yǎng)液，以分光光度計(測定波長為600nm)測OD值，并以1 OD600=9 X 106 cell/mL之計算方法，將細胞稀釋成5 X 106cell/mL(測到的成以72即為應稀釋的倍數(shù))。
- 將上述之酵母菌細胞數(shù)稀釋成為5 X 104 cell/mL，取200 m L菌液植種于96孔盤內(nèi)，使每一個well的酵母菌含量為100000，50000，10000，1000個，將此酵母菌培養(yǎng)二天后，觀察酵母菌生長情形。
- 96孔盤分配情形如下：每一大隔代表三重複
標準液濃度0 酵母菌個數(shù)1000 | 標準液濃度0 酵母菌個數(shù)10000 | 標準液濃度0 酵母菌個數(shù)50000 | 標準液濃度0 酵母菌個數(shù)100000 |
標準液濃度0.05 ppb 酵母菌個數(shù)1000 | 標準液濃度0.05 ppb 酵母菌個數(shù)10000 | 標準液濃度0.05 ppb 酵母菌個數(shù)50000 | 標準液濃度0.05 ppb 酵母菌個數(shù)100000 |
標準液濃度0.1 ppb 酵母菌個數(shù)1000 | 標準液濃度0.1 ppb 酵母菌個數(shù)10000 | 標準液濃度0.1 ppb 酵母菌個數(shù)50000 | 標準液濃度0.1 ppb 酵母菌個數(shù)100000 |
標準液濃度0.2 ppb 酵母菌個數(shù)1000 | 標準液濃度0.2 ppb 酵母菌個數(shù)10000 | 標準液濃度0.2 ppb 酵母菌個數(shù)50000 | 標準液濃度0.2 ppb 酵母菌個數(shù)100000 |
標準液濃度0.5 ppb 酵母菌個數(shù)1000 | 標準液濃度0.5 ppb 酵母菌個數(shù)10000 | 標準液濃度0.5 ppb 酵母菌個數(shù)50000 | 標準液濃度0.5 ppb 酵母菌個數(shù)100000 |
標準液濃度1 ppb 酵母菌個數(shù)1000 | 標準液濃度1 ppb 酵母菌個數(shù)10000 | 標準液濃度1 ppb 酵母菌個數(shù)50000 | 標準液濃度1 ppb 酵母菌個數(shù)100000 |
標準液濃度5 ppb 酵母菌個數(shù)1000 | 標準液濃度5 ppb 酵母菌個數(shù)10000 | 標準液濃度5 ppb 酵母菌個數(shù)50000 | 標準液濃度5 ppb 酵母菌個數(shù)100000 |
培養(yǎng)液為SD-His 酵母菌個數(shù)1000 | 培養(yǎng)液為SD-His 酵母菌個數(shù)10000 | 培養(yǎng)液為SD-His 酵母菌個數(shù)50000 | 培養(yǎng)液為SD-His 酵母菌個數(shù)100000 |