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馬鈴薯Y病毒屬診斷技術(shù)
1.生物學(xué)測(cè)定接種紅藜或奎藜,PRSV-W和ZYMV都可造成局部壞疽斑,再利用其他判別植物,即可鑑別二者。
2.電子
顯微鏡觀察利用陰染法可觀察到病毒顆粒,呈長(zhǎng)絲狀,大小約750nm x 12nm,但無(wú)法鑑定病
毒種類(lèi)。必要時(shí)以抗體捕捉及修飾,進(jìn)行免疫吸附電子顯微鏡觀察可提高檢出率及輔助鑑定。
3.內(nèi)含體的鑑定PRSV和ZYMV都會(huì)在寄主細(xì)胞內(nèi)形成風(fēng)車(chē)狀內(nèi)含體,可經(jīng)超薄切片以電子顯微鏡觀察。
4.血清學(xué)反應(yīng)傳統(tǒng)多元抗體應(yīng)用在凝集法、瓊脂雙擴(kuò)散法、酵素連結(jié)免疫檢測(cè)法、免疫點(diǎn)漬法外,單元抗體的應(yīng)用及各種改良式抗原抗體反應(yīng)法的發(fā)展,使檢測(cè)的靈敏度大為提高。
5.鞘蛋白的鑑定進(jìn)行SDS-PAGE,利用鞘蛋白亞基分子量的不同可鑑定病毒屬,再以抗體染色進(jìn)行西方墨漬法,可準(zhǔn)確鑑定病毒種。
6.反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)當(dāng)樣品量極少或病毒在組織中濃度很低時(shí),用上述方法檢測(cè)不到時(shí),用RT-PCR方法則會(huì)獲得較靈敏的效果。且其特異性強(qiáng),必要時(shí)可進(jìn)一步分析核酸組成,完成病毒種與系統(tǒng)(strain)的鑑定
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