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本文標(biāo)題："光學(xué)顯微觀察細(xì)胞黏菌各時(shí)期的形態(tài)特征"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2012-11-13 23:07:18 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
研究過程與方法：
1.采集地采集土壤，將采集土壤制成懸浮液靜至約十分鐘。
2.將表層的懸浮液滴在已種有大腸桿菌的乳糖酵母抽出物培養(yǎng)基 (Lactose Yeast-Extract Agar)，此步驟需在無菌操作臺(tái)。
3.培養(yǎng)基放至于25℃恒溫培養(yǎng)箱中，三天后觀察是否有細(xì)胞黏菌的孢子囊體或偽原生質(zhì)體出現(xiàn)，若有發(fā)現(xiàn)則轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。
4.更換采集地點(diǎn)重複以上步驟。
5.定時(shí)觀察恒溫培養(yǎng)箱中的培養(yǎng)基，以了解細(xì)胞黏菌的生活史。
6.定時(shí)將已長出的細(xì)胞黏菌作轉(zhuǎn)移。
7.以解剖和光學(xué)顯微觀察細(xì)胞黏菌各時(shí)期的形態(tài)特征，及孢子之形狀大小、極粒有無，孢子囊柄頂端和基部寬度。
8.抽取其孢子進(jìn)行DNA萃取及定序工作，比較親緣關(guān)系。
9.根據(jù)參考文獻(xiàn)、序列輔助和專家指導(dǎo)來進(jìn)行菌種鑑定
一、采樣
〈一〉準(zhǔn)備采集所需用具、鏟子、筆、密封袋、相機(jī)
〈二〉找尋腐植質(zhì)豐富的土壤，且須在樹蔭下陰涼處
〈三〉將落葉撥開，每個(gè)樣區(qū)約1~3包(腐植質(zhì)較豐富者挖較多)
〈四〉注明采樣地點(diǎn)、人、時(shí)間
〈五〉若未立刻進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)，需將采樣的土先冷藏
〈六〉采樣時(shí)，選擇天氣良好的日子，且落葉多的腐植土
二、培養(yǎng)基的調(diào)配
本實(shí)驗(yàn)采用乳糖酵母抽出物培養(yǎng)基（Lactose Yeast-Extract Agar）（Norberg,1971）
〈1〉 以燒杯取1L的水，分別以電子秤秤出酵母萃取液【Yeast Extract】0.5g、乳糖1g，
加入燒杯中以小勺子攪拌。
〈二〉將1L的溶液分裝至準(zhǔn)備好的五個(gè)錐形瓶中，每瓶約200ml
〈三〉將洋菜【Agar】剪成小塊，每小瓶秤3g加入，以刮杓拌勻，將剩馀的agar碎塊裝入密封的罐子內(nèi)。
〈四〉以錫箔紙將瓶口密封，放入高溫高壓滅菌器內(nèi)進(jìn)行滅菌。(121℃ 20min)
〈五〉約1hr后將錐形瓶取出，移至無菌操作臺(tái)，倒入培養(yǎng)皿。
〈七〉經(jīng)過一段時(shí)間冷卻凝固后，以PARAFILM密封培養(yǎng)基，并裝袋放入恒溫箱
三、細(xì)胞黏菌的分離
〈一〉準(zhǔn)備10數(shù)個(gè)小燒杯裝入50ml的蒸餾水，以刮勺將樣土挖出，每杯約5g的樣土
（二）靜置等待約10分鐘，至土皆沉淀，使其懸浮于液面
（三）至無菌操作臺(tái)，將培養(yǎng)基打開
（四）將燒杯上層的液體，以玻璃滴管吸出，滴于培養(yǎng)基上，每個(gè)燒杯滴兩個(gè)培養(yǎng)基
（五）滴完后，注明人、時(shí)間、及樣土代號，將培養(yǎng)基密封，并放回恒溫箱中
（六）數(shù)天后，將培養(yǎng)基以解剖顯微鏡觀察，尋找是否有細(xì)胞黏菌，有的話便進(jìn)行轉(zhuǎn)移
四、細(xì)胞黏菌的轉(zhuǎn)移
〈一〉在無菌操作臺(tái)中，以解剖顯微鏡觀察細(xì)胞黏菌
〈二〉將針筒燒至紅熱之后置入絕對酒精中冷卻，迅速的在酒精燈上過火使酒精蒸發(fā)
〈三〉將培養(yǎng)皿中生長的細(xì)胞黏菌子實(shí)體整株或孢子囊堆，以滅菌后的解剖針挑起，轉(zhuǎn)植于新鮮的培養(yǎng)基
〈四〉以PARAFILM封口，再置于25℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
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