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本文標(biāo)題："細(xì)胞透明且?guī)в泄鉂傻皇菆A形呈不規(guī)則形狀"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2012-11-18 2:46:23 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
我目前所做的實(shí)驗(yàn)叫做''phagocytosis assay''
首先取出腹腔與骨髓細(xì)胞，lyse掉紅血球細(xì)胞，在以1xPBS
wash，最后回溶于1 ml 1xPBS，取10 ul細(xì)胞+10 ul 0.4% trypan blue混均勻后，取10 ul滴于血球計(jì)數(shù)器去計(jì)算活細(xì)胞，我主要是要算macrophage和neutrophil，染了trypan blue后，在顯微鏡下以10x去算活細(xì)胞。本來實(shí)驗(yàn)室都是直接取10 ul滴于血球計(jì)數(shù)器去計(jì)算活細(xì)胞，但是我算出來的細(xì)胞都比別人少很多，所以后來改用染trypan blue去計(jì)算，不過算出來還是比別人少。為什么呢?
我目前有幾個(gè)問題
1.細(xì)胞 染trypan blue后 ，活細(xì)胞呈現(xiàn)透明帶有光澤且為圓形，對(duì)嗎?
2. 但是有些細(xì)胞雖然為透明且?guī)в泄鉂�，但不是圓形，呈不規(guī)則形狀，請(qǐng)問這樣的細(xì)胞是快死了還是被刺激所以呈現(xiàn)要吞噬的形狀(我用的tip和1xPBS都是滅菌的)，請(qǐng)問這樣的細(xì)胞算活細(xì)胞嗎?
3. 有些細(xì)胞雖然為透明且?guī)в泄鉂�，但是比要算的�?xì)胞小一號(hào)有的更小，這是活細(xì)胞嗎還是氣泡?
有的比要算的大，是活細(xì)胞嗎?
用cytometer數(shù)細(xì)胞時(shí)有幾點(diǎn)要注意不知道你有沒有做到？
chamber邊界問題、細(xì)胞液的稀釋倍率、換算原細(xì)胞液的公式
還有你是否有先把細(xì)胞打散成單一細(xì)胞，而不是有些細(xì)胞還聚在一團(tuán)
染trypan blue后活細(xì)胞是發(fā)光透明狀，因活細(xì)胞細(xì)胞膜沒有破裂，染劑進(jìn)不去細(xì)胞，自然就染不到了
你的實(shí)驗(yàn)步驟中提到用1x PBS回溶，是否有注意在最短時(shí)間內(nèi)loading細(xì)胞液至chamber內(nèi)呢，說不定是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)手法影響到細(xì)胞
做實(shí)驗(yàn)有時(shí)也需要經(jīng)驗(yàn)，多試幾次，如果還是一樣，可以考慮在別人進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)在一旁觀摩，或者請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室的其他人帶者你一起做，一起找出錯(cuò)誤
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