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本文標題："電荷耦合元件(CCD)搭配顯微鏡實時觀察微觀結(jié)構(gòu)"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2013-5-9 1:13:47 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
主要是關(guān)于建立一套稜鏡式全反射顯微熒光顯微術(shù)系統(tǒng)，以進行單分子研究。全反射顯微術(shù)成功的關(guān)鍵，
在于有效地降低背景熒光值。全反射在界面所建立的漸逝場，其強度為入射光能量的數(shù)倍，并隨離界面的距離增加而呈指數(shù)性衰減，
其滲透深度頗為狹窄，僅侷限于界面附近0.1微米的帶狀區(qū)域，故能選擇性激發(fā)臨近界面的熒光分子。
漸逝場中的熒光標記分子經(jīng)激發(fā)所放出的熒光訊號，經(jīng)高數(shù)值孔徑的物鏡收集后，
分別以電荷耦合元件（CCD）及雪崩式光二極體（APD）偵測。電荷耦合元件的優(yōu)點在于空間的解析與多個單分子資訊的同時擷取，
雪崩式光二極體的優(yōu)點在于時間解析度，可用于單頻道或雙頻道的光子計數(shù)，以進行時間系列的解析。
針對ATP合成酶，本實驗選擇CyDye作為熒光標記分子，包括Cy3及Cy5，并采用532nm綠光雷射作為Cy3的激發(fā)光源。
將濃度在10~100pM等級的CyDye洋菜溶液，旋鍍制成含水達99%的洋菜膠體薄膜以進行系統(tǒng)測試。測試的結(jié)果，無論是CCD影像分析，
或是APD光子計數(shù)量測，均顯示本實驗所建立的稜鏡式全反射顯微熒光顯微術(shù)系統(tǒng)，確實具有進行單分子研究的能力，
其中最主要的證據(jù)系Cy3單分子單一步驟光淬滅的行為。本實驗的背景熒光值僅每秒約20個單光子，訊號背景比值平均在13左右，
最高達20，且咸信仍有提升空間。在本實驗系統(tǒng)的觀測下，Cy3熒光單分子在發(fā)生光淬滅之前，約可產(chǎn)生100,000～1,000,000個光電子訊號。
單分子實驗系統(tǒng)確立后，未來將可以生物馬達為主角，進行單分子動態(tài)行為分析與動力學研究，包括以Cy3配合Cy3，
進行熒光共振能量傳遞（Fluorescence Resonance Energy Transfer）之實驗，以期透過化學觀點，探討生物馬達的工作。
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