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胚胎實(shí)驗(yàn)用專業(yè)圖像
顯微鏡附外接或內(nèi)接光源
囊胚期胚胎分離
儀器
解剖顯微鏡附外接或內(nèi)接光源
材料
1. 受精 3.5 天之母鼠
2. 解剖器具一套(包含大剪刀、小剪刀、小號鑷子、鐵夾)
3. B35
4. M2 及 M16 培養(yǎng)液(Sigma)
5. 口吹式毛細(xì)管
6. 解剖顯微鏡
7.礦物油
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 在 B35 中滴入數(shù)滴 M16 培養(yǎng)液,并以礦物油覆蓋,如圖示。
2. 將 B35 培養(yǎng)皿放入 37℃、CO2 培養(yǎng)箱預(yù)溫待用。
3. 再取兩個 B35,皆放入適量 M2。
4. 將受精之母鼠斷頸,腹部朝上放置。
5. 以 70% 酒精擦拭消毒。
6. 以解剖剪刀將母鼠外皮剪開至胸部,接著剪開母鼠皮下肌肉層,至內(nèi)臟清處可見。
7. 移開內(nèi)臟,找出位于母鼠背部兩側(cè)子宮。以器具清除周圍組織。
8. 剪取輸卵管和子宮交界處至陰道口之部份,置于含 M2 的 B35 中。
9. 以 1 ml 針筒吸取 M2,自子宮口插入針頭以沖洗分離出的子宮,平均一條子宮沖洗 0.5 ml 的 M2。
10. 將沖出之囊胚于顯微鏡下觀察,可見被沖出之囊胚。
11. 以口吹式毛細(xì)管將囊胚吸至含 M16 的 B35 中,置 37℃ 培養(yǎng),等待顯微注射
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