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本文標(biāo)題："用于觀察某動(dòng)物囊胚期細(xì)胞用專(zhuān)業(yè)光學(xué)顯微鏡"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2013-10-28 14:39:58 本站主頁(yè)地址：http://www.y7853.cn
用于觀察某動(dòng)物囊胚期細(xì)胞用專(zhuān)業(yè)光學(xué)顯微鏡
囊胚期胚胎顯微注射
儀器
顯微注射操作臺(tái)
材料
1. 懷孕 3.5 天母鼠
2. 37℃、5% CO2 恒溫培養(yǎng)箱
3. 胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液（ES培養(yǎng)液）
4. ES 細(xì)胞
5. PBS、Trypsin/EDTA、礦物油
6. 嘴吹式胚胎傳送毛細(xì)玻璃管、顯微注射針及顯微胚胎固定針
7. 凹槽之載玻片
8. IM
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 由懷孕 3.5 天母鼠子宮收集囊胚（方法見(jiàn) 以mitomycin C 處理纖維母細(xì)胞）
2. 將受精卵以口吹式毛細(xì)管放入含 ES 細(xì)胞培養(yǎng)液中，并覆蓋礦物油避免蒸發(fā)，
再放入 37 ℃、5% CO2 培養(yǎng)箱中備用。
3. 于進(jìn)行顯微注射前約 1~2 小時(shí)，準(zhǔn)備 ES 細(xì)胞。
4. 取 ES 細(xì)胞液一滴，滴于凹槽載玻片中央，并覆蓋礦物油，避免蒸發(fā)。
5. 以毛細(xì)管吸取胚胎至玻片上 ES 細(xì)胞液中（一次約取 10 顆左右胚胎即可）。
6. 于顯微注射操作臺(tái)之高倍視野（400X）下，
以顯微注射針仔細(xì)吸取飽滿(mǎn)光亮之 ES 細(xì)胞約10~15顆。
7. 另以顯微胚胎固定針吸附一顆囊胚。
8. 在高倍視野下，將顯微注射針尖和被吸附之胚胎調(diào)整一致焦距，且肉眼可清晰觀察。
9. 小心將顯微注射針穿刺入囊胚空腔中，須注意不可由含內(nèi)在細(xì)胞層（ICM, inner cell mass）
之一側(cè)穿刺，且穿刺時(shí)盡量避免傷害滋養(yǎng)外胚層細(xì)胞。
10. 轉(zhuǎn)動(dòng)油壓注射器，將 ES 細(xì)胞注入。
11. 抽出注射針，并釋放完成注射之囊胚。
12. 重覆步驟 6，繼續(xù)進(jìn)行下一顆囊胚之注射
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