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本文標(biāo)題："細(xì)胞學(xué)-桑椹胚及囊胚細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察用顯微鏡"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2013-10-28 14:40:30 本站主頁(yè)地址：http://www.y7853.cn
桑椹胚及囊胚細(xì)菌培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)觀察用顯微鏡
桑椹胚(Morula)與干細(xì)胞的聚合實(shí)驗(yàn)
儀器
1. 解剖顯微鏡
2. 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱
材料
1. 授精 2.5 天之母鼠
2. 解剖用具
3. 細(xì)菌培養(yǎng)皿
4. M2 及 M16 培養(yǎng)液
5. Acid Tyrode's Solution (Sigma T-1788)
6. 礦物油 (Sigma M8410)
7. ES cells
8. Aggregation needle (DN-09, BLS, Hungary)
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 以 aggregation needle 在細(xì)菌培養(yǎng)皿上，鉆出適當(dāng)大小的洞；于洞上滴上 M16培養(yǎng)液滴，
并以礦物油覆蓋。
2. 將培養(yǎng)皿放入 37℃, 5% CO2 培養(yǎng)箱備用。
3. 另取一 35mm 培養(yǎng)皿，制備 M16 培養(yǎng)液滴，并以礦物油覆蓋。
4. 取授精 2.5 天之母鼠，剪取輸卵管與相連之部分子宮，于 M2 液滴中清洗；
于解剖顯微鏡下，用 M2 培養(yǎng)液，于輸卵管開(kāi)口，以 30 號(hào)針頭沖出 morulae。
5. 以口吹式毛細(xì)管收集 morulae，于 M2 液滴中清洗，置于含 M16 之 35mm 培養(yǎng)皿中培養(yǎng)備用。
6. 取出 ES cells 培養(yǎng)皿，PBS 清洗三次，以 0.05% trypsin 37℃ 作用 30 秒，以培養(yǎng)液中和trypsin 并打下
細(xì)胞，800rpm 離心 5 分鐘，吸除上清液后以培養(yǎng)液打散細(xì)胞。
7. 于顯微鏡下以毛細(xì)管挑取適當(dāng)?shù)募?xì)胞團(tuán) （約 8~10 顆一團(tuán)），于 M16 液滴清洗后置入先前制備之
培養(yǎng)皿洞中（每洞一團(tuán)細(xì)胞）。
8. 于另一培養(yǎng)皿中點(diǎn)上 M2 及 acid tyrode's solution 數(shù)滴。
9. 取出 morulae 置于 acid tyrode's solution 中作用數(shù)秒，待透明膜溶解后，立即取出置于 M2液滴中清洗。
10. 將去膜之 morulae 置于含 ES cells 細(xì)胞團(tuán)之洞中（每洞兩顆），成三明治堆疊狀
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