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本文標(biāo)題："使用熒光顯微技術(shù)觀察和測(cè)定細(xì)胞膜的光源特點(diǎn)"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2013-11-3 20:07:19 本站主頁(yè)地址：http://www.y7853.cn
使用熒光顯微技術(shù)觀察和測(cè)定細(xì)胞膜的光源特點(diǎn)
熒光技術(shù)在細(xì)胞膜研究上的應(yīng)用
熒光技術(shù)在細(xì)胞膜與膜蛋白的研究上主要有熒光共振能量轉(zhuǎn)移
(FRET-fluorescent resonance energy transfer)、熒光淬熄(fluorescence quenching)、光漂白
熒光回復(fù)(FRAP -fluorescence recovery after photobleaching)與熒光顯微技術(shù)
(fluorescence microscopy technique)。
FRET原理是一熒光物質(zhì)(donor)受到特定波長(zhǎng)的光線(xiàn)照射后會(huì)被激發(fā)而發(fā)出另一
特定波長(zhǎng)的光，此能量轉(zhuǎn)移的距離約7-10 nm，在此距離內(nèi)若有一接收者
(acceptor)則此能量會(huì)被吸收，而熒光減弱。FRET廣泛應(yīng)用于膜蛋白的研究
藉由donor與acceptor標(biāo)識(shí)在欲觀察的分子上，便可由熒光強(qiáng)弱知道兩種
分子結(jié)合與混合程度。Fluorescence quenching與FRET的原理類(lèi)似，這類(lèi)熒光分
子在高濃度(~70mM)彼此距離接近時(shí)會(huì)發(fā)生分子之間會(huì)發(fā)生self-quenching的現(xiàn)
象而讓熒光減弱，而在低濃度時(shí)熒光較強(qiáng)。
Fluorescence quenching經(jīng)常被運(yùn)用到微胞泄漏實(shí)驗(yàn)，
當(dāng)細(xì)胞膜上有破洞產(chǎn)生時(shí)，如果熒光分子外泄則濃度降低，
因而造成熒光強(qiáng)度變化。
FRAP的原理是在細(xì)胞膜的局部區(qū)域, 以激光光源集中激發(fā)局部區(qū)域,
讓其造成分子局部的熒光漂白，再來(lái)測(cè)量熒光回復(fù)的速度
而從回復(fù)的速度可以知道脂質(zhì)分子擴(kuò)散速率，進(jìn)而了解細(xì)胞膜相變的機(jī)制
相較于前面所提的熒光技術(shù)，熒光顯微技術(shù)是一個(gè)能夠直接、及時(shí)觀察細(xì)胞膜上
變化的技術(shù)。當(dāng)人造膜上有兩種區(qū)塊共存時(shí)，被標(biāo)識(shí)的熒光分子會(huì)選擇停留在特
定的區(qū)塊而產(chǎn)生熒光分部不均勻，
來(lái)提供足夠的反差來(lái)觀察人造膜上區(qū)塊尺寸大小、形狀與動(dòng)態(tài)行為
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