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本文標(biāo)題:"熒光顯微鏡觀察標(biāo)本染色的方式有哪些"

新聞來源:未知 發(fā)布時(shí)間:2014-2-20 13:48:20 本站主頁地址:http://www.y7853.cn

熒光顯微鏡觀察標(biāo)本染色的方式有哪些

    吖啶橙熒光染色法吖吮橙是一種熒光染料,與細(xì)胞核結(jié)
合后,經(jīng)激發(fā)產(chǎn)生出亮綠色的熒光。通常,除了一些未經(jīng)固定容易
變形、甚至破碎的原生動(dòng)物,可經(jīng)100^'200餓酸蒸氣固定外,無須
固定便可直接染色。用重蒸餾水配制1寫的吖啶橙母液,置于暗處
保存?zhèn)溆谩J褂脻舛葹槿f分之一,即取母液稀釋100倍。在載玻片
上滴上一滴濃集原生動(dòng)物,再滴上一滴萬分之一的吖啶橙染色液,
加上蓋玻片,立即置于熒光顯微鏡下觀察,可見到細(xì)胞核發(fā)出深黃
綠色的熒光。細(xì)胞質(zhì)則呈現(xiàn)微弱的黃色一紅色的熒光。時(shí)間一長,
熒光會(huì)慢慢變?nèi)踔料�,故需抓緊時(shí)間觀察。

    PA-PI熒光染色法PAPI是一種特異性非常強(qiáng)的專染DNA的熒光染料,
非常靈敏。用微吸管吸取一些原生動(dòng)物置于梅氏蛋白的玻片上。
盡量吸去水分,讓原生動(dòng)物蟲體呈單層,平鋪于載玻片上,注意不能
令其干燥。待蟲體快要開始干燥時(shí),滴上一些卡諾氏固定液固定,

并使蟲體粘貼在載玻片上。固定時(shí)間約5分鐘,之后,經(jīng)蒸餾水洗2^-3次,
洗脫固定液,空氣干燥。
滴加上0.5-1克/毫升濃度的重蒸餾水配制的DAPI染色液,便可在熒光顯微鏡
下觀察。細(xì)胞核發(fā)出強(qiáng)烈的白色帶微黃的熒光。

由于DAPI是專門與DNA結(jié)合、形成復(fù)合物的染料,故原生動(dòng)物發(fā)出熒光之處,
便是DNA所在地。正因?yàn)槿绱耍珼API熒光染色法顯示原生動(dòng)物核較之其他
熒光染色法優(yōu)越,可以顯現(xiàn)出細(xì)胞核內(nèi)DNA量的變化和位置。對(duì)于研究其有性生殖,
特別是纖毛蟲的接合生殖過程中,核器的發(fā)育變化過程十分適合。同其他熒光染
色一樣,時(shí)間一長,DAPI的激發(fā)熒光也會(huì)逐漸變?nèi)踔料�,必須抓緊時(shí)間觀察或拍照

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