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細(xì)胞封片觀察用專業(yè)圖像
熒光顯微鏡的應(yīng)用
免疫酶顯微示蹤技術(shù),在用于細(xì)胞性抗原分子的檢測(cè)方面已有成
熟的方法系統(tǒng)。以下僅以過(guò)氧化物酶(Peroxidase. PO)標(biāo)記抗體為
例,簡(jiǎn)述其中常用的方法原理與流程。
直接法直接法是指試驗(yàn)中所用的特異性抗體,直接經(jīng)示蹤酶標(biāo)記,
并將此酶標(biāo)抗體直接與受檢抗原起反應(yīng)。故在本法中僅需要一種特異
性抗體。直接法可用于各種杭原(包括抗體、酶等)的檢測(cè)。其優(yōu)點(diǎn)
是特異性高;缺點(diǎn)是一種酶標(biāo)抗體,只能檢測(cè)一種抗原。
1.固定組織及其相應(yīng)的抗原。
2.加特異性酶標(biāo)抗體與己固定的抗原反應(yīng),形成抗原與酶標(biāo)抗體
復(fù)合物,清洗未反應(yīng)成分。
間接法間接法是指試驗(yàn)中所用的酶標(biāo)抗體不是直接與受檢抗原起
反應(yīng)。而是與已跟抗原結(jié)合后的特異性抗體起反應(yīng)。故本法中需要采
用受檢抗原的特異性抗體與酶標(biāo)抗體1.固定組織細(xì)胞及其相應(yīng)的抗原。
2.加受檢抗原特異性抗體,使其反應(yīng)后形成抗原抗體復(fù)合物。清
洗未反應(yīng)成分。
3.加抗受檢抗原特異性抗體的酶標(biāo)抗體。使受檢抗原通過(guò)特異性
抗體間接地與酶標(biāo)抗體結(jié)合。清洗未反應(yīng)成分。
4.加底物顯色。封片后使用熒光顯微鏡觀察。
間接法的優(yōu)點(diǎn)是較直接法敏感,而且用一種動(dòng)物的特異性杭體。
配上另一種杭該動(dòng)物杭體的酶標(biāo)抗體,即可對(duì)不同受檢抗原進(jìn)行檢測(cè)。
但本法的特異性較直接法差,必須進(jìn)行大量的對(duì)照試驗(yàn)。
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