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植物體上做免疫定位實(shí)驗(yàn)用光學(xué)
熒光顯微鏡廠商
在植物體上做免疫定位的技術(shù)
免疫電子
顯微鏡定位技術(shù)與免疫熒光定位技術(shù)的原理和操作步驟基
本上是一樣的。但由于熒光標(biāo)記在透射電子顯微鏡下是看不到的(有關(guān)
免疫掃描電鏡技術(shù)見第五章),因此在做免疫電子顯微鏡定位時(shí),必須
應(yīng)用在電子顯微鏡下能被看到的標(biāo)記�,F(xiàn)時(shí)用來做免疫電子顯微鏡定位
的標(biāo)記,用得最多的是鐵蛋白(ferritin),其次是金膠體(colloidal
gold),血藍(lán)蛋白(haemocyanin )、病毒等。
在植物體上無論是做熒光或電子顯微鏡免疫定位基本上都采用以下
兩種方法:
1.在包埋之前進(jìn)行定位和
2.在包埋之后進(jìn)行定位。
第一個(gè)方法是先將細(xì)胞或原生質(zhì)體或組織放在標(biāo)記了的抗體溶液內(nèi)
處理,然后再做包埋和切片。而第二個(gè)方法則是先將材料包埋,然后再
在切片上進(jìn)行免疫定位。第一個(gè)方法的缺點(diǎn)是標(biāo)記抗體不易滲入細(xì)胞內(nèi),
因此容易造成假定位或負(fù)定位。但假如用后一種方法則不會出現(xiàn)這一個(gè)
問題,因?yàn)樵谇衅瑫r(shí)細(xì)胞受到損傷,這使標(biāo)記抗體能輕易地進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。
故此在一般的情況下,用后一種方法來做免疫定位是比較好的。
姑勿論是先定位后包埋,抑或先包埋后定位,總之材料必定得被切
成片,然后才能在光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察。
現(xiàn)今用來制備切片的方法很多。從前大多數(shù)工作者都用冰凍或石蠟
切片,但現(xiàn)今則有轉(zhuǎn)用塑料薄切片的趨勢
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