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熒光顯微鏡生物成像技術(shù)簡(jiǎn)介-微生物實(shí)驗(yàn)
生物成像領(lǐng)域另一個(gè)重要的發(fā)展是把近場(chǎng)和遠(yuǎn)場(chǎng)集成在一起以增加成像的
動(dòng)態(tài)范圍。在同一個(gè)設(shè)備的內(nèi)部進(jìn)行近場(chǎng)和遠(yuǎn)場(chǎng)之間的切換,即可以獲得高分
辨力小區(qū)域掃描,也可以獲得大區(qū)域遠(yuǎn)場(chǎng)圖像。一些組合了近場(chǎng)
顯微鏡和共聚
焦顯微鏡的商用設(shè)備已經(jīng)在市場(chǎng)上出售了。
熒光壽命成像顯微術(shù),通常略寫成FI.1M,能夠提供細(xì)胞內(nèi)或者組織的熒光
壽命的空間分布(Tadrous, 2000; Bastiaens&匆uire, 1999).利用熒光劑的熒
光壽命作為增強(qiáng)對(duì)比的機(jī)制,相對(duì)穩(wěn)態(tài)熒光顯微術(shù)來(lái)說有很多優(yōu)勢(shì)。首先,熒光
壽命對(duì)熒光劑的局部環(huán)境高度敏感。這種成像形式所達(dá)到的分辨力為研究生命
系統(tǒng)動(dòng)態(tài)活動(dòng)提供了可胎。對(duì)于上面講到的FRET成像,F(xiàn)LIM有一個(gè)優(yōu)勢(shì):由
于供體能量轉(zhuǎn)移到受體上去了,因此只需要測(cè)量供體的熒光壽命,就可以測(cè)里其
能量轉(zhuǎn)移。FLIM還有一個(gè)優(yōu)勢(shì),就是它不受熒光強(qiáng)度、濃度的影響,并且最大
程度上與熒光劑的光致漂白無(wú)關(guān)。而且,盡管某些熒光團(tuán)的熒光譜相似,但在不
同的環(huán)境下其壽命不同,因此壽命是更加敏感的環(huán)境測(cè)試量。FLIM已經(jīng)被用
在多種不同類型的單光子和雙光子激發(fā)成像裝置上,包括多光子標(biāo)記成像、離子
濃度數(shù)量成像、含氧數(shù)最成像和FRET的能最轉(zhuǎn)移效率測(cè)量(Periasamy等,
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