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雖然物鏡的選擇通常被最少考慮,但是在成像實驗優(yōu)化
配置時物鏡可能是最需要重點考慮的因素。物鏡決定樣品成
像的空間分辨率和控制從樣品收集的熒光量。通常情況下,
最好選擇具有最大數值孔徑(NA)的鏡頭,
因為這樣可以最大地收集信號,其他在實際操作中需要
考慮的因素還有工作距離。視野和在銳減設計中的光學校正
當選擇FP數字成像用的濾淡然片組時,考慮濾光片使用
的方式會很有幫助。例如,當使用濾光片在肉眼區(qū)分熒光時,
這是倒置寬場顯微鏡或熒光立體顯微鏡的常用觀察情形,考
慮的重點就是收集盡可能多的來自樣品的熒光,這一點非常
重要,因為肉眼對于進來的光相對不敏感,但是卻可以非常
精確地區(qū)分不同顏色,因此,用于肉眼觀測FP的濾光片應該
是寬譜帶的濾光劑片,而對于數字成像,重點又是截然不同
的,因為檢測器無法區(qū)分散射出的光子顏色。因此對于CCD
芯片和光電倍增管檢測器來說,最好的濾光片是針對被檢測
FP的發(fā)射光的窄譜璉濾光片。現在可以從濾光片制造商處購
買到各種高質量的濾光片組,許多這些濾光片組針對單色或
多色FP成像特制的,讀者可以參考濾光片制造商的網站(本
章網絡資源部分)確定每種濾光片的特征。
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