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不重的波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)量熒光有哪些特點(diǎn)-測(cè)量
顯微鏡
再吸收
如果熒光發(fā)色團(tuán)的吸收光譜和發(fā)射光譜發(fā)生了重疊,則熒
光發(fā)色團(tuán)可能本身出現(xiàn)熒光再吸收,吸收增加的時(shí)候,再吸
收影響熒光光譜的面積會(huì)越來(lái)越大,那時(shí)候同,對(duì)應(yīng)于重疊
帶的發(fā)射強(qiáng)度將逐漸減弱,出現(xiàn)的發(fā)射光譜便會(huì)改。
利用地激發(fā)和發(fā)射曲線(xiàn)不重的波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)量熒光便可以
抵消吸收,這可以用有長(zhǎng)波長(zhǎng)截止值的阻擋濾波器來(lái)完成,
例如,測(cè)量常規(guī)副薇苯胺-福爾根反應(yīng)的熒光時(shí),用截止值
630nm的阻擋濾波器可以在受再吸收干涉的波長(zhǎng)范圍以外測(cè)
量熒光,遺憾的是,許多光電倍增管在綠-紅波長(zhǎng)范圍內(nèi)的
光譜靈敏度不均一,而許多重要的熒光發(fā)色團(tuán)的主發(fā)射恰恰
在琮一范圍內(nèi),在這種情況下,探測(cè)光譜中不受再吸收影響
的成分的效率較低,而且再吸收的光代表了較大比例的發(fā)射
光。
熒光強(qiáng)度和熒光生色團(tuán)濃度間的關(guān)系
有人已證明測(cè)微熒光術(shù)原則上有可能不用微顯像測(cè)密術(shù)的
掃描技術(shù)就得到直接測(cè)量,然而,這只有在假定樣品內(nèi)不同
部分的FRP對(duì)總熒光的貢獻(xiàn)是和它們的濃度成定量比的情況
下地得如此。
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