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細(xì)胞勻漿的制備-生物圖像便攜教學(xué)
顯微鏡
組織和細(xì)胞勻漿的制備
組織的勻漿引起了形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)細(xì)微部分的喪失。
如果勻漿是打算作為從一個(gè)組織中分離一種化合物的初步階
段,那么這可能是不重要的。但是,如果要研究代謝過(guò)程,那
就必須盡可能地保持組織的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)的完整性。很
遺憾的是,勻漿技術(shù)在組織分級(jí)分離研究中的使用仍然是憑
經(jīng)驗(yàn)的。勻漿過(guò)程是為了打碎組織和打開(kāi)細(xì)胞的邊界(細(xì)胞
壁或膜)以釋放細(xì)胞內(nèi)含物。為了達(dá)到這個(gè)目的,可以使用很
多不同的設(shè)備和技術(shù),但是它們的操作原理始終沒(méi)有被很好
地認(rèn)識(shí)。在缺乏滿意的理論基礎(chǔ)和方法的適當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化的情況
下,勻漿更多地是屬于一種藝術(shù)而不是一種科學(xué)。鑒于不同
的組織在某些細(xì)胞器的脆性以及細(xì)胞和組織對(duì)裂解的抗性這
二方面有很大的區(qū)別,因此對(duì)每一種材料的勻漿提出了不同
的問(wèn)題,這些問(wèn)題只能通過(guò)反復(fù)的試驗(yàn)來(lái)解決。這種技術(shù)的
主要貢獻(xiàn)是作為分離細(xì)胞成分的初步階段,因此可以用來(lái)推
斷代謝過(guò)程的細(xì)胞內(nèi)定位。勻漿本身也能直接用于對(duì)加入化
合物的吸收和代謝的研究。如果,化合物進(jìn)人完整細(xì)胞由于
膜的通透性而遇到困難時(shí),這是一個(gè)很有用的技術(shù)o
懸浮介質(zhì)的選擇
勻漿對(duì)懸浮組織的介質(zhì)沒(méi)有一個(gè)明確的選擇方法。查閱
文獻(xiàn)可以得到一些指導(dǎo),但是,最終還是要在各種介質(zhì)上進(jìn)行
試驗(yàn)的基礎(chǔ)上來(lái)選擇。
通常用蔗糖使介質(zhì)具有足夠的滲透壓,以防止顆粒膨脹
和破裂。如果蔗糖干擾酶的鑒定,有時(shí)可以用甘露醇來(lái)代替。
為了保存顆粒的完整性和防止酶的失活,有很多特殊的配方。
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