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本文標題："免疫電子顯微鏡( I S E M ) 等技術(shù)被廣泛應(yīng)用于植物病毒診斷"

本試驗利用橙綠蛋白質(zhì)染劑染色法 (光學(xué)顯微鏡觀察)、陰染及超薄切片法 (電子顯微鏡觀察) 及血清學(xué)方法
(酵素聯(lián)結(jié)免疫分析法、組織轉(zhuǎn)漬法及西方轉(zhuǎn)漬法) 均能偵測到罹病組織內(nèi)之 L N V，且反應(yīng)明確。就實際應(yīng)用而
言，使用酵素聯(lián)結(jié)免疫分析法 ( E L I S A ) 較為迅速又可同時偵測較多之樣本，但為保證鑑定之品質(zhì)，經(jīng) E L I S A 初步
診斷之結(jié)果必要時得再藉由電子顯微鏡直接觀察罹病組織或其他的偵測方法加予佐證，其結(jié)果可信度會更高。血清學(xué)方法如 E L I S A、dot-blot immunoassy 及免疫電子顯微鏡( I S E M ) 等技術(shù)被廣泛應(yīng)用于植物病毒診斷 ( 9 , 1 0 , 1 7 , 1 9 , 2 0 , 2 1 )，
其中 E L I S A 幾乎可偵測每一種植物病毒 ( 9 )。本試驗純化L N V 鞘蛋白 (38 kDa) 做為抗原製備兔子抗血清或以 L N V
老鼠單元抗體應(yīng)用于 ELISA, Western blot, direct tissue blot
( D T B ) 及 I S E M (5) 均能有效偵測到罹病組織內(nèi)之 L N V 抗原，但由于老鼠單元抗體可以不斷地培養(yǎng)供應(yīng)，在實際應(yīng)
用上更計具有價值。
L N V 機械接種于洋桔梗后，以 D T B 偵測結(jié)果顯示在高溫 ( 2 6℃) 情況下接種比低溫 ( 2 1℃) 病斑多且病斑較大
(圖五)，此可能說明在高溫時，病毒複製較快且複製之量
較多。在 2 6℃，機械接種 L N V 于洋桔梗，以 i n d i r e c t
E L I S A 及 D T B 比較其偵測 L N V 之效率，結(jié)果 D T B 于接種
后 1 2 小時即能偵測到新複製之病毒，而 indirect ELISA 則
于接種后 4 8 小時始能明確偵測到病毒 (表一)，顯然 D T B
能較早偵測到病毒。E L I S A 雖具有前述之優(yōu)點，但它仍受
限于實驗室進行，而 D T B 則不受此項限制，它可于田間
或苗圃立即取樣并進行檢測，由于其能較早期偵測到病毒
且操作簡便，對于抗病毒育種選拔、大量健康種苗生產(chǎn)之
早期發(fā)現(xiàn)病毒，在種苗管理上確具有發(fā)展之潛力及實用之