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顯微鏡生物學(xué)標(biāo)本的制備主要?dú)w為兩類
電子顯微鏡(electron microscopy,EM)是大多數(shù)細(xì)胞生物學(xué)家的
重要工具。如果使用得當(dāng),電子顯微鏡可以在亞細(xì)胞水平甚至分子
水平提供生物結(jié)構(gòu)組成的直觀證據(jù)。
可用的電子顯微鏡方法
生物學(xué)標(biāo)本的制備主要?dú)w為兩類:一類是用樹脂包埋后,切成
超薄切片,再進(jìn)行正染色或免疫標(biāo)記;另一類是使用微粒材料制成
的薄涂層,繼之以金屬投影,風(fēng)干負(fù)染或快速冰凍/玻璃化(同時(shí)
可不負(fù)染或負(fù)染)。冰凍斷裂技術(shù)在過去曾被廣泛應(yīng)用,但是現(xiàn)在
已不常用,盡管該技術(shù)在很多情況下仍然有用。對(duì)初學(xué)者而言,將
它作為一種常規(guī)的操作相當(dāng)困難,樹脂包埋細(xì)胞懸液、單細(xì)胞層、
細(xì)胞器的超薄切片技術(shù)基本都要經(jīng)過組織水平常用的固定、染色步
驟。懸浮細(xì)胞、分離出的細(xì)胞器可在沉淀后分散于低熔點(diǎn)的瓊脂糖
中。瓊脂糖也可以添加在原位單細(xì)胞層中,直接適用于塑料細(xì)胞培
養(yǎng)瓶、小型培養(yǎng)系統(tǒng)和培養(yǎng)皿。在將固定、脫水后的材料包埋入樹
脂前,相比反復(fù)離心沉淀、懸浮而言,含有感興趣細(xì)胞成分的膠狀
瓊脂糖顆粒在制作標(biāo)本階段操作容易得多,因而這種瓊脂糖的包囊
方法顯得尤其便捷。
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