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桿菌生長(zhǎng)到高細(xì)胞密度-細(xì)菌培養(yǎng)
顯微鏡
大腸桿菌
如果不需要翻譯后的修飾,通常選擇大腸桿菌作為初始宿主。
大腸桿菌普及性的主要原因是人們對(duì)它有深厚的知識(shí)基礎(chǔ)。我們對(duì)
大腸桿菌生理和遺傳學(xué)的理解可能要遠(yuǎn)超過(guò)其他任何生物。大腸桿
菌有非常寬廣的宿主背景(即特殊突變的組合),以及種類豐富的載
體和啟動(dòng)子。這種龐大的知識(shí)基礎(chǔ)極大地便利了復(fù)雜的基因操作。
背景明確的載體和啟動(dòng)子大大加快了合適生物催化劑的開發(fā)。
大腸桿菌有相對(duì)較高的生長(zhǎng)速率,也能達(dá)到很高的細(xì)胞濃度(
大于509干重/L),并具借助于特殊的載體一啟動(dòng)子組合而可能具
有很高的表達(dá)水平(約占總蛋白的25%~50%或更多),這導(dǎo)致了極
高的體積生產(chǎn)率。大腸桿菌也能在簡(jiǎn)單廉價(jià)的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。所有
這些因素給大腸桿菌帶來(lái)了許多經(jīng)濟(jì)上的優(yōu)勢(shì)。
開發(fā)能使大腸桿菌生長(zhǎng)到高細(xì)胞密度的策略是一項(xiàng)重要的技術(shù)
貢獻(xiàn)。乙酸和其他代謝副產(chǎn)物的積累能夠顯著抑制生長(zhǎng)。通過(guò)控制
葡萄糖的流加來(lái)阻止培養(yǎng)基中葡萄糖的大量積累可以阻止溢流代謝
和乙酸形成。如果能夠在線監(jiān)測(cè)或預(yù)知葡萄糖消耗速率,可以將葡
萄糖流加和其消耗速率偶聯(lián)在一起進(jìn)行流加控制。
但是,大腸桿菌并不是一種絕對(duì)完美的宿主。主要問(wèn)題在于大
腸桿菌通常不分泌蛋白質(zhì)。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)被保留在細(xì)胞內(nèi)并達(dá)到一個(gè)很
高的水平時(shí),溶解的活性蛋白質(zhì)的量通常不再增加,這是因?yàn)榈鞍?/div>
質(zhì)的水解作用或形成了不溶解的包含體。
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