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研究標(biāo)本三維結(jié)構(gòu)收集同焦平面水平的圖像
z軸的光切間距
為了研究標(biāo)本的三維結(jié)構(gòu),要收集一系列不同焦平面水平的圖
像,相鄰焦平面的間距由向聚焦器發(fā)出的指令決定。確保重建圖像
在z、Y及z軸上的比例正確的最簡(jiǎn)單辦法就是收集的光切面在2軸上
的間距與z、y軸上的像素值相同。但是,z軸上標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)取樣
所需的焦平面間距應(yīng)不小于z、Y軸上的像素值,原因在于縱向分辨
率比橫向分辨率差。最佳的焦平面間距(依據(jù)奈奎斯抽樣定理)為縱
向分辨率除以
更小的焦平面間距會(huì)導(dǎo)致取樣過(guò)多,光漂白的危險(xiǎn)性隨之增加
。照明強(qiáng)度
照明強(qiáng)度逐漸提高到使熒光發(fā)射量達(dá)到飽和水平的過(guò)程中,熒
光發(fā)射量呈線(xiàn)性增長(zhǎng)。照明強(qiáng)度剛好低于能使熒光發(fā)射量達(dá)到飽和
水平時(shí),信號(hào)背景比與信噪比達(dá)到最佳。通過(guò)在光路中插入中密度
濾光片和/或使激光器在極限功率下工作來(lái)調(diào)節(jié)激光掃描
顯微鏡的
照明強(qiáng)度。一般來(lái)說(shuō),光漂白比例在可接受范圍內(nèi)的情況下,照明
強(qiáng)度越高,得到的圖像越好。
共聚焦圖像的反差及信息量受光電倍增管(PMT)放大儀黑色電
平及增益的影響。為獲取最大信息量,
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