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本文標(biāo)題："含細(xì)菌葉綠素的自養(yǎng)微生物-微生物分析顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2016-12-26 0:56:39 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
含細(xì)菌葉綠素的自養(yǎng)微生物-微生物分析顯微鏡
TIREM技術(shù)的優(yōu)勢
理論上，BCM中所有含細(xì)菌葉綠素的自養(yǎng)微生物都能夠被IREM
法檢測到。然而在實際的野外海水樣中，由于藍(lán)細(xì)菌的豐度很大以
至于能夠造成BCM計數(shù)的嚴(yán)重誤差。而其他的光合自養(yǎng)生物由于豐
度較小或者細(xì)胞體積較大而不會造成BCM顯微計數(shù)的干擾。在這里
，集中解決的對象是主要的自然干擾者——藍(lán)細(xì)菌，尤其是在大洋
廣泛分布豐度又高的原綠球藻。基于紅外落式熒光顯微鏡、CCD自
動成像和圖像的數(shù)字化處理，為相同顯微鏡視野下的紅外細(xì)胞和藍(lán)
細(xì)菌細(xì)胞提供了精確的計數(shù)。
在落式熒光技術(shù)的應(yīng)用中，若目標(biāo)細(xì)胞太小或胞內(nèi)色素含量太
低，常規(guī)設(shè)置的適用性一一尤其是激發(fā)光波長和強(qiáng)度都應(yīng)在應(yīng)用前
進(jìn)行檢測。以原綠球藻為例，理論上，原綠球藻的最佳激發(fā)光是45
0～480 nm；但原綠球藻在這些激發(fā)光下很難進(jìn)行顯微計數(shù)，因為
檢測時450～480 nm的激發(fā)光會使原綠球藻細(xì)胞淬滅得太快以至于
顯微鏡系統(tǒng)無法得到可信的數(shù)據(jù)。
原綠球藻細(xì)胞的觀察可維持一個更長的時間，從而使數(shù)據(jù)的獲得更
加容易。因此在TIREM法中統(tǒng)一采用546±12 rim的激發(fā)光，對聚球
藻和原綠球藻進(jìn)行激發(fā)檢測。
當(dāng)聚球藻和原綠球藻同時存在于樣品中時，由于這兩類主要的
藍(lán)細(xì)菌群發(fā)出不同強(qiáng)度水平的熒光，因此對藍(lán)細(xì)菌進(jìn)行時間序列成
像是必要的。單位時間里強(qiáng)熒光顆粒所發(fā)出的光子要比弱熒光顆粒
發(fā)出的光子多，因此CCD在曝光時間內(nèi)接受了絕大部分的來自強(qiáng)熒
光顆粒的光子，從而強(qiáng)熒光顆粒能夠在圖像中被清楚的顯示，而弱
熒光顆粒則不能從背景噪音中區(qū)別出來。
經(jīng)過一段時間的激發(fā)光曝光后，聚球藻細(xì)胞的熒光衰退到一定
程度，原綠球藻細(xì)胞才逐漸變得可見。雖然聚球藻和原綠球藻的絕
對熒光強(qiáng)度隨著曝光時間的延長而下降，但根據(jù)熒光淬滅動力學(xué)理
論，熒光衰退也符合半衰期原理，因此在相同時間下強(qiáng)熒光的衰退
程度要比弱熒光的衰退程度顯著。
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