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本文標(biāo)題："低密度顆粒的淺層梯度溶液直徑計量圖像顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2016-12-26 12:47:58 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
低密度顆粒的淺層梯度溶液直徑計量圖像顯微鏡
差速離心有兩個問題：低回收率和沉淀中小顆粒的污染。例如在第
一步中，在樣品頂端的核至少是最先暴露在低轉(zhuǎn)速下，要運(yùn)動最長的路
徑，因此它們不會在離心過程中成為穩(wěn)定沉淀的組分。另外，小顆粒(
如線粒體)，一開始緊靠著管子的底部，運(yùn)動的路徑最短，暴露在最高
的轉(zhuǎn)速下，會成為沉淀組分。由于較長的沉降路徑以及導(dǎo)致的g。i。與
g。。。之間最大差距，使得吊桶式轉(zhuǎn)子中這些問題最為嚴(yán)重。而體積
相同的固定角轉(zhuǎn)子沉降路徑更短，推薦用于差速離心。
小顆粒物質(zhì)對于沉淀的污染可以通過“洗滌”過程來減少。這包括
將沉淀重懸于勻漿介質(zhì)中再離心，合并兩種上清用于下一輪離心。有時
候要重復(fù)洗滌。而洗滌過程又有它自身伴隨的問題：除非進(jìn)行沉淀重懸
時非常輕柔(在寬松配置的Dounce勻漿器中更佳，使用研杵少許研磨)，
否則沉淀中的細(xì)胞器本身會破碎。這也是相當(dāng)費(fèi)時的。
盡管如此，在不少的情況下差速離心是唯一的純化方法，從大鼠肝
臟或牛心臟中制備所謂的“重線粒體組分”就是其中之一(見實(shí)驗方案4
．7)。在這個例子中，在“對線粒體友好的介質(zhì)”提供的等滲條件下，
能夠快速地進(jìn)行差速離心以產(chǎn)生一定純度線粒體組分的，對于保留偶聯(lián)
的氧化磷酸化來說至關(guān)重要。使用密度梯度溶液可以增加純度，但是時
間的增加，以及由于密度梯度溶液離心時增加的流體靜壓和高離心力對
細(xì)胞器的應(yīng)力，都會嚴(yán)重?fù)p傷線粒體的功能完整性。
僅僅從差速離心根據(jù)顆粒大小來分離這個角度來說，它也十分重要
。比如說過氧化物酶體或溶酶體的浮力密度梯度溶液純化就一直用于輕
線粒體組分分離(見實(shí)驗方案4．8)排除可能具有相似密度的較小顆粒。
也因為同樣的原因，完整的高爾基膜復(fù)合體可以相似地以50009離心力
從肝臟勻漿液中純化出來。另一方面，勻漿液中大的快速沉降顆粒除非
預(yù)先除去，不然可能干擾用于分離小的低密度顆粒的淺層梯度溶液。
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