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液體介質(zhì)中用剪切的方法從支撐基質(zhì)中釋放細胞
機械法分離組織
在液體介質(zhì)中用剪切的方法從支撐基質(zhì)中釋放細胞,這樣分離出的
細胞群可能含有很多血紅細胞,而有核細胞的活力由于機械損傷作用會
比較低。然而,大部分的分離方法都需要用機械方法,把組織切成小塊
以增加酶消化的表面積,并且使酶更容易進入組織中。軟組織可以很容
易被剪刀剪碎,較硬的組織就需要用手術(shù)刀片剪碎。從剪碎了的組織碎
片中進一步釋放細胞需要在懸液中使用吸管反復(fù)吹打組織碎片以形成的
足夠大剪切力,將細胞從組織上分離下來。
必須確定組織樣品相關(guān)的生物危害性,并使用適當(dāng)?shù)脑O(shè)備避免這種
危害。在以下的實驗方案中,均使用Ⅱ級生物安全柜,以保護使用者及
組織免受污染。推薦使用無菌操作,可保證儲存介質(zhì)保持無菌,降低由
于微生物存在而產(chǎn)生的結(jié)果不確定性。如果進行細胞培養(yǎng),無菌操作則
是非常必要的。
(2)器材
所有直接接觸組織的器材必須滅菌。
組織剪(注:在培養(yǎng)皿中,使用彎剪比直剪更易于沿其表面修剪,
從而提供更大的修剪空間)
鑷子
一次性手術(shù)刀
玻璃平皿(注:解剖器具會損壞塑料平皿,碎屑可能會損傷細胞)
巴斯德吸管(短型和長型)
標(biāo)注體積刻度的試管(圓錐形底)
試管架
臺式離心機
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