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本文標(biāo)題："線粒體、溶酶體和過氧化物酶體研究電子顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2016-12-27 13:58:29 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
線粒體、溶酶體和過氧化物酶體研究電子顯微鏡
器材
除了微粒體的沉淀以外，所有的差速離心都能在冷凍高速離心機(jī)中
進(jìn)行。為了將小顆粒對(duì)沉淀物的污染降到最小限度(見上文)，與吊桶式
轉(zhuǎn)子相比更推薦使用固定角轉(zhuǎn)子(管體積相同)，因?yàn)樗鼈冊(cè)诎家好婧凸?/div>
底之間的沉降路徑更小，離心力的差距也小[¨，16]。很明顯，轉(zhuǎn)子的
角度越小(對(duì)于垂直方向來說)，分離的效率越高，但是小角度的另一個(gè)
影響——沉淀趨于堆積得較松散，界限不明確，這是一個(gè)缺點(diǎn)。實(shí)際上
，大約30。的轉(zhuǎn)子是個(gè)折中的辦法。除了沉淀細(xì)胞核(第一步)這個(gè)唯一
的特例之外，都推薦使用固定角轉(zhuǎn)子；傾向于在這一步中使用吊桶式轉(zhuǎn)
子只是由于它常規(guī)地用于低速離心機(jī)(低速離心機(jī)主要匹配于這種轉(zhuǎn)子)
。此外，核與下一個(gè)最大的細(xì)胞器(線粒體)之間的沉降率差距如此之大
，以至于轉(zhuǎn)子的種類不再那么重要了。
密度梯度離心
現(xiàn)在廣泛認(rèn)為，特別是對(duì)于一些可以在相對(duì)較低的離心力(1000g～
15000g)下沉淀的較大細(xì)胞器(細(xì)胞核、線粒體、溶酶體和過氧化物酶體
)來說，在吊桶式轉(zhuǎn)子長沉降路徑下以1000009以上的轉(zhuǎn)速，使用黏稠、
高滲的蔗糖梯度溶液，既不方便也對(duì)細(xì)胞器有潛在的傷害。因此，顯著
地趨向于使用低黏稠度梯度介質(zhì)如Nycodenz@或碘克沙醇，這些梯度溶
液與蔗糖溶液(或甚至等滲的溶液)相比有更低的摩爾滲透壓濃度。盡管
傳統(tǒng)的吊桶式轉(zhuǎn)子仍然被廣泛地用于密度梯度離心，垂直或接近垂直轉(zhuǎn)
子的短沉降路徑不僅減少了離心時(shí)間，也將梯度溶液中強(qiáng)加于顆粒之上
相當(dāng)大的流體靜壓的影響降到了最小。
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