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本文標(biāo)題："質(zhì)粒DNA的提取-細(xì)菌分解的物質(zhì)作碳源"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2017-1-19 15:49:37 本站主頁(yè)地址：http://www.y7853.cn
質(zhì)粒DNA的提取-細(xì)菌分解的物質(zhì)作碳源
降解性質(zhì)粒，編碼一系列能降解復(fù)雜物質(zhì)的酶，從而含該質(zhì)粒的細(xì)
菌能利用一般細(xì)菌難以分解的物質(zhì)作碳源。降解質(zhì)粒以其所降解的底物
命名，例如降解樟腦的質(zhì)粒(CAM)、降解萘的質(zhì)粒(NAP)、降解甲苯的質(zhì)
粒(TOE)和降解二甲苯的質(zhì)粒(Ⅺm)等。
質(zhì)粒DNA的提取是基因工程中基本技術(shù)之一，現(xiàn)已有多種成熟的方
案可供選擇。例如，利用堿性或煮沸條件下質(zhì)粒DNA與染色體DNA變性和
復(fù)性的差異而進(jìn)行分離。利用插入EB(溴乙錠)造成不同構(gòu)型DNA，因而
沉降性質(zhì)不同，通過(guò)CsCl梯度離心分離。利用羥基磷灰石在特定條件下
只吸附雙鏈DNA的羥基磷灰石法。利用高鹽及有SDS存在下大分子沉淀而
質(zhì)粒分子保持在上清液中的高濃度NaCI法。利用加熱后變性與復(fù)性差異
而造成質(zhì)粒存在于聚乙二醇相中，等等。往往是利用玻璃纖維膜(或硅
膠)吸附DNA，這時(shí)先利用堿性SDS裂解細(xì)胞，除去染色體，并在DNA復(fù)性
的高鹽條件下用膜吸附質(zhì)粒DNA，然后用洗滌液洗去降解的RNA、蛋白質(zhì)
等雜質(zhì)，最后用TE或無(wú)菌水等低鹽條件洗脫得到質(zhì)粒DNA。整個(gè)過(guò)程能
在lh之內(nèi)完成。且提取的質(zhì)粒DNA質(zhì)量高，可直接用于酶切、連接、轉(zhuǎn)
化、標(biāo)記、測(cè)序等操作。
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