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麥芽糖結(jié)合蛋白酵母細(xì)胞分析
顯微鏡
亞細(xì)胞分離的研究可確定一種蛋白質(zhì)是否定位于正確的細(xì)胞器中。
在大腸桿菌中,通過(guò)對(duì)細(xì)菌細(xì)胞進(jìn)行滲透壓休克能夠較為容易地獲
得胞質(zhì)中的組分。通過(guò)超聲波或采用French壓迫細(xì)胞使細(xì)胞裂解后
,通過(guò)差速離心將細(xì)胞膜分離出來(lái)。內(nèi)膜和外膜通過(guò)等密度蔗糖梯
度離心彼此分開(kāi)。大腸桿菌的四個(gè)亞細(xì)胞器(細(xì)胞質(zhì)、內(nèi)膜、周質(zhì)
和外膜)會(huì)出現(xiàn)交叉污染。特定細(xì)胞器中唯一存在的標(biāo)志蛋白可用
來(lái)判斷是否發(fā)生交叉污染及是否分離出正確的細(xì)胞器。OmpA是外膜
的標(biāo)志蛋白;麥芽糖結(jié)合蛋白或堿性磷酸化酶前體是胞質(zhì)的標(biāo)志蛋
白;NADH氧化酶是內(nèi)膜的標(biāo)志蛋白;6一磷酸葡萄糖脫氫酶是細(xì)胞
質(zhì)的標(biāo)志蛋白。
真核細(xì)胞
蛋白質(zhì)向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔中的轉(zhuǎn)運(yùn)可以通過(guò)監(jiān)測(cè)酵母細(xì)胞中信號(hào)肽的
切除和糖基化來(lái)確定。
完成細(xì)胞膜轉(zhuǎn)運(yùn)之后,前體蛋白的信號(hào)肽被信號(hào)肽酶切除。
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