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本文標(biāo)題："用一種酶酶切然后乙醇沉淀回收DNA分子"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2017-2-26 0:38:57 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
用一種酶酶切然后乙醇沉淀回收DNA分子
DNA的限制性內(nèi)切核酸酶剪切與DNA片段的回收
對目的DNA分子和載體分子進(jìn)行酶切以獲得相匹配的末端是DNA
連接的首要條件。酶切可以是單酶切也可以是雙酶切。單酶切操作
比較簡單，只需將限制性內(nèi)切核酸酶最適的緩沖液、目的DNA和相
應(yīng)的限制性內(nèi)切核酸酶混合，用滅菌的ddHzO補(bǔ)足體積，在37℃水
浴1～3h即可。但對于雙酶切，特別是兩種酶所用緩沖液成分不同(
主要是鹽離子濃度不同)或反應(yīng)溫度不同，操作就顯得復(fù)雜一些，
這時(shí)可以采用如下措施解決：①先用一種酶酶切，然后乙醇沉淀回
收DNA分子后再用另外一種酶酶切；②先進(jìn)行低鹽要求的酶酶切，
然后添加鹽離子濃度到高鹽的酶反應(yīng)要求，加入第二種酶進(jìn)行酶切
；③使用通用緩沖液進(jìn)行雙酶切。具體要根據(jù)酶的反應(yīng)要求進(jìn)行，
盡量避免星號效應(yīng)。
載體及目的DNA片段經(jīng)酶切后，如果無多余的片段(如載體單切
)可以用酚／氯仿抽提后，經(jīng)乙醇沉淀回收用于連接。但多數(shù)還有
多余片段，必須電泳分離后回收目的片段�；厥占瓤梢圆捎玫腿埸c(diǎn)
膠法和凍融法等經(jīng)典方法，也可以采用商品化的試劑盒。這些商品
化的試劑盒多采用凝膠裂解液(如含有降低熔點(diǎn)的NaI)融化凝膠釋
放DNA后，采用特殊的硅膠樹脂或玻璃奶吸附DNA后，用洗液洗去雜
質(zhì)，最后用洗脫液洗出DNA，具體操作參見產(chǎn)品說明書。這里僅介
紹低熔點(diǎn)膠法和凍融法兩種經(jīng)典方法
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