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本文標題："通過含有多孔顆粒的層析柱(固定相)分析顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-3-11 22:02:20 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
通過含有多孔顆粒的層析柱(固定相)分析顯微鏡
幾種測定結(jié)合膜蛋白(即區(qū)別于整合膜蛋白的外圍膜蛋白)性質(zhì)
的方法。盡管大多數(shù)整合膜蛋白經(jīng)疏水多肽片段與膜結(jié)合，但是一
個亞單位也可通過糖基化的磷脂酰肌醇(GPI)基團固定于膜上。本
單元介紹的檢測通過GPI基團與膜結(jié)合的方法，是基于磷脂酰肌醇
磷脂酶C(PI—PI℃)水解GPI基團而設(shè)計的。通過GPI固定的蛋白質(zhì)
和一些跨膜蛋白質(zhì)具有不被某些非離子型去垢劑如Triton X-100增
溶的抗性，可能是由于這些蛋白質(zhì)與質(zhì)膜上的鞘糖脂和膽固醇富含
域結(jié)合的緣故。這些結(jié)構(gòu)域有時存在于被稱為質(zhì)膜穴樣凹陷內(nèi)部。
本單元為使用如辛基配糖化合物或CHAPS等去垢劑使不溶于Triton
的質(zhì)膜蛋白的溶解提供實驗方案，也包括穴樣膜結(jié)構(gòu)域的分離程序
。
天然狀態(tài)蛋白質(zhì)的大小可根據(jù)其流體動力學(xué)參數(shù)，如沉降系數(shù)
和Stokes半徑來計算。許多情況下，通過這些參數(shù)可計算出天然蛋
白質(zhì)或蛋白質(zhì)復(fù)合物的分子質(zhì)量。常用作測定蛋白質(zhì)相對分子質(zhì)量
的方法：蔗糖梯度沉降速率分析法。該方法將蛋白質(zhì)經(jīng)梯度分離后
洗脫成各組分，通過測定固有行為或聚丙烯酰胺凝膠電泳結(jié)合免疫
吸附或免疫沉淀來研究。
除沉淀速率分析外，另一個估計天然狀態(tài)下細胞蛋白質(zhì)分子質(zhì)
量的常用方法是體積排阻色譜法。該種方法在洗脫過程中，蛋白質(zhì)
溶液(流動相)通過含有多孔顆粒的層析柱(固定相)時，較大的蛋白
質(zhì)不能進入顆粒內(nèi)部而沿顆粒間隙最先流出柱外，而小分子蛋白質(zhì)
進入顆粒內(nèi)部多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，以致最后流出柱外，從而使樣品中分
子大小不同的蛋白質(zhì)得到分離，并可與已知分子質(zhì)量的標準蛋白質(zhì)
的比較測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量。
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