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體積排阻層析是測定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的常用方法
體積排阻層析法(凝膠過濾)測定分子質(zhì)量
體積排阻層析(SEC)是測定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的常用方法之一。
凝膠過濾是體積排阻層析的一種,用水作流動(dòng)相,而體積排阻層析
的流動(dòng)相既可以是水也可以是其他溶劑。層析用的支持物或凝膠溶
脹后形成多孔顆粒,溶質(zhì)分子的洗脫由于分子質(zhì)量小的物質(zhì)可滲人
多孔顆粒的內(nèi)部,受到的阻滯作用大,流程長;而較大的分子,根
據(jù)體積大小而排阻在多孔顆粒的外面,所以大分子優(yōu)先于小分子被
洗脫出來。
排阻層析的分離范圍和選擇
選擇最合適的預(yù)充填柱或充填材料是層析成敗的關(guān)鍵,因?yàn)榉?/div>
離時(shí)填料孔徑的大小控制著溶質(zhì)大小的范圍。為選擇柱填料,
如果研究的蛋白質(zhì)的大小不易估計(jì),最好選用分離范圍廣的填
料。填料的選擇性越高分離范圍受到的限制就越多。選擇性高的填
料更能得出溶質(zhì)分子質(zhì)量的精確值。
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