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硅膠顆粒表面包裹著季胺等強(qiáng)配體聚合物顆粒
陰離子交換色譜法
陰離子交換色譜過程中,帶負(fù)電荷的核酸被吸附于帶正電荷的
固定相中,它們?cè)跇渲斜浑x子強(qiáng)度更大的流動(dòng)相置換。DNA被吸
附到陰離子交換硅膠基質(zhì)中,而RNA、蛋白質(zhì)以及其他細(xì)胞成分則
被洗脫。與體積排阻色譜一樣,離子交換色譜常用的兩種基質(zhì)也是
硅膠或聚合物,例如,二乙氨基乙醇(DE—AE)等弱陰離子交換配體
修飾的硅膠顆粒,表面包裹著季胺等強(qiáng)配體的聚合物顆粒
陰離子交換樹脂有多孔性和非多孔性兩種基質(zhì)。有報(bào)道指出
一種非多孔性微粒(<5wn)陰離子交換可洗脫出高達(dá)12000bp的DNA限
制酶斷片和寡核苷酸。不同孔徑的多孔樹脂可,于更高或更低分子
量的核酸分離,孔的大小應(yīng)足夠使核酸能夠通過,固定相也應(yīng)提
供足夠的表面積,因此,大孔徑樹脂(>4000A)適用于分子量較高的
DNA限制酶斷片。陰離子交換柱常用的洗脫流動(dòng)相為Tris一氯化鈉
和PBS等緩沖液,提純的DNA洗脫后就要進(jìn)行測(cè)序。許多廠家在包裝
試劑盒里提供了吸附劑,與酚氯法和體積排阻色譜法相比,這種方
法更便捷,產(chǎn)率更高。
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