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本文標(biāo)題："酚細(xì)胞裂解物的萃取是DNA提取的最早技術(shù)之一"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2017-7-4 0:27:04 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
酚細(xì)胞裂解物的萃取是DNA提取的最早技術(shù)之一
核酸的分離
在細(xì)胞裂解及核酸酶滅活之后，細(xì)胞碎片可通過過濾和I沉淀
的方法去除，但殘留在溶液中的其他小分子和蛋白必須與核酸分離
。．目前常州的幾種核酸提純的方法包括萃取法、沉淀法、膜濾法
、色譜法、吸附純化法以及電泳法，有時(shí)要同時(shí)應(yīng)用多種提純方法
以得到所需純度的核酸二核酸提純的困難之處在于去除與目標(biāo)核酸
具有相似理化性質(zhì)的物質(zhì)，經(jīng)研究這類物質(zhì)包括脂多糖、RNA或者
線粒體DNA：大部分基因組DNA在裂解過程中變性沉淀，所以在后續(xù)
的步驟中需要去除大量的RNA和蛋白質(zhì)在非分析類的應(yīng)用中，核酸
的分離提純方法同樣非常重要，如基因治療以及培養(yǎng)產(chǎn)藥質(zhì)粒，這
些方法都有類似的步驟：從宿主細(xì)胞中分離質(zhì)粒，然后進(jìn)行凈化、
富集，最后提純質(zhì)粒，
溶劑萃取沉淀法
使用酚進(jìn)行細(xì)胞裂解物的萃取是DNA提取的最早技術(shù)之一，在第
六、七章中已做陳述。懸液中的單細(xì)胞經(jīng)過去垢劑處理后，再加入
蛋白酶以水解其中的蛋白分子。非核酸成分萃取到酚一氯有機(jī)溶劑
層中，而核酸分子則殘留在水相中。分離水相并加入兩倍體積的異
丙醇，相對(duì)分子質(zhì)量大的核酸會(huì)形成白色細(xì)絲狀沉淀，然后使用不
含DNA酶的核糖核酸酶(RNA酶)去除RNA。重復(fù)上述步驟，加入蛋白
酶、苯酚萃取、異丙醇進(jìn)行二次處理，沉淀后加熱煮沸或者離心樣
品，并用乙醇洗兩遍分離純DNA，即可得到純凈白色絲狀的DNA
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