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聚合物基質(zhì)的填充物一般用親水性凝膠
色譜法在核酸純化中的應用
通常在色譜分析前,需要進行裂解后的分離或富集。富集方法
需要使用乙酸銨和聚乙二醇沉淀法來進一步去除宿主蛋白以及小分
子核酸。與此同時,這些方法也在色譜提純前減少了樣本或處理液
體的體積,而分離過程也同樣需要離心和過濾以去除細胞碎片:
色譜法可相對容易地進行優(yōu)化并按比例增大,而且許多質(zhì)粒特
征,如電荷數(shù)和大小可以通過特定的設計得以區(qū)分。
小顆粒留在了凝膠的孔穴里,而大分子則直接通過排阻色譜法
適用于將小的環(huán)狀DNA與大的質(zhì)粒分離或者將無機鹽及一些小分子
從生物大分子中去除,同時也可去除熒光標記反應混合物中游離的
熒光標記的核酸。排阻色譜法的主要缺點在于在分離限制酶斷片時
存在上限,單一的凝膠柱并不能提純所有的核酸。
排阻色譜法中常用親水層包裹的網(wǎng)狀聚合基質(zhì)或硅膠顆粒基質(zhì)
,硅膠顆粒的缺點在于會通過吸附造成溶質(zhì)的保留,并可能會造成
溶質(zhì)分子的降解為降低吸附量,這些硅膠顆粒通常與有機衍生物反
應進行修飾:
聚合物基質(zhì)的填充物更常用,一般用親水性凝膠,可使用水溶
液對核酸進行洗脫。這些凝膠是相對惰性的,其交聯(lián)程度決定了孔
徑的大小葡聚糖、聚丙烯酰胺和瓊脂是三種比較常見的交聯(lián)聚合物
。Amersham Biosciences出售的交聯(lián)葡聚糖,商品名為Sephadex,
其根據(jù)在水中膨脹時保水量進行分類;
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