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本文標(biāo)題："食品微生物的檢測(cè)-采用不同熒光標(biāo)記分子"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2017-8-13 18:17:36 本站主頁(yè)地址：http://www.y7853.cn
食品微生物的檢測(cè)-采用不同熒光標(biāo)記分子
分子信標(biāo)技術(shù)(Stratagene, La Jolla, CA)是一種全新的技術(shù)
，即將用于食品微生物的檢測(cè)之中。在這項(xiàng)技術(shù)中，所有的反應(yīng)會(huì)
在同一個(gè)試管中完成。分子信標(biāo)是一個(gè)特制的發(fā)夾形的雜交探針，
它用來(lái)與目標(biāo)PCR產(chǎn)物結(jié)合。該探針的一端結(jié)合了一個(gè)熒光基團(tuán)，
另一端結(jié)合了一個(gè)熒光淬滅基團(tuán)。當(dāng)不存在目標(biāo)PC R產(chǎn)物時(shí)，分子
信標(biāo)以發(fā)夾形式存在，不會(huì)產(chǎn)生熒光信號(hào)。當(dāng)反應(yīng)生成目標(biāo)PCR產(chǎn)
物時(shí)，分子信標(biāo)與PCR產(chǎn)物結(jié)合從而導(dǎo)致發(fā)夾結(jié)構(gòu)伸展。這時(shí)淬滅
基團(tuán)遠(yuǎn)離熒光基團(tuán)，熒光信號(hào)產(chǎn)生并被檢測(cè)到。熒光信號(hào)的檢測(cè)是
與PC R反應(yīng)同步進(jìn)行的，實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)PCR產(chǎn)物的“實(shí)時(shí)”檢測(cè)，進(jìn)
一步可證實(shí)樣品中目標(biāo)病原菌的存在。該系統(tǒng)與TaqMan系統(tǒng)具有相
同的效率，不同之處在于分子信標(biāo)直接檢測(cè)PCR產(chǎn)物的存在，而Taq
Man系統(tǒng)只能報(bào)告鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的發(fā)生。采用具有不同熒光標(biāo)記的分子
信標(biāo)，可在同一個(gè)試管中檢測(cè)不同的PCR產(chǎn)物，因此可以對(duì)多種目
標(biāo)病原菌或分子進(jìn)行“多重分析”。這是一項(xiàng)嶄新的技術(shù)，目前尚
未在食品微生物檢測(cè)領(lǐng)域普及。
PCR系統(tǒng)的一個(gè)主要問(wèn)題是PCR產(chǎn)物的交叉污染。如果陽(yáng)性PCR
產(chǎn)物(例如前一次反應(yīng)得到的沙門(mén)菌PCR產(chǎn)物)進(jìn)人到下次分析的反
應(yīng)體系中，就會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。法國(guó)巴斯德研究所(Paris, Fran
ce)開(kāi)發(fā)的Probelia系統(tǒng)試圖在整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程中采用尿啥吮替代
胸腺啥陡，以消除PCR產(chǎn)物的污染。所以反應(yīng)管中只有A, U, G, C
四種堿基而沒(méi)有T。由Probelia系統(tǒng)得到的PC R擴(kuò)增產(chǎn)物將是AU, G
C配對(duì)，而不是常規(guī)的AT, GC配對(duì)。PCR產(chǎn)物與微孔板中的已知序列
雜交，從而得以識(shí)別。雜交結(jié)果的檢測(cè)類似于微孔板中ELISA結(jié)果
的檢測(cè)，也是通過(guò)顏色反應(yīng)顯示出來(lái)。
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