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本文標題："GFP熒光和細胞活力分析圖像顯微鏡的應用"
新聞來源：未知 發(fā)布時間：2017-8-14 20:20:46 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
GFP熒光和細胞活力分析圖像顯微鏡的應用
GFP熒光和細胞活力
采用GFP對細菌標記已成為一個普通的方法，然而一個棘手的
問題卻很少引起人們的注意，即GFP及其變種能否指示細胞活力。
也就是，在顯微鏡下觀察到的所有發(fā)出熒光的GFP標記細胞是否都
可以認為是活細胞?Lowder等報告說，Pseudomonas刀uo-rescens的
死亡細胞與GFP從細胞泄露之間存在很強的相關性。大多數(shù)死細胞(
活力染色法)無GFP熒光，有小比例的細胞雖然死亡但仍具有綠色熒
光[40]。我們將GFP標記S. enterica細胞經(jīng)過高溫、干燥或次氯酸
鈣等致死因素處理后也得到r相似的研究結果[41]。因此，GFP作為
活細胞內(nèi)穩(wěn)定的熒光物質會因細菌細胞死亡而迅速消失。但是，因
為少數(shù)熒光細胞的生理狀態(tài)不清楚，所以在采用GFP標記法分析細
胞活力時，最好是再采用另外一種方法來對結果進行確認。26.3.3
.4細菌生理的其他熒光指示劑
盡管很多研究用熒光物質作為細菌呼吸或酶活性指示標記來研
究水生環(huán)境下具有代謝活性的細菌的檢測問題[42,43)，但這些熒
光物質很少用于植物上細菌的活性研究。類似地，通過PH熒光探針
【如5一(和6一)梭基熒光素、BCECF, SNAFL, SNARF] [42.43]的熒
光比率成像和通過GFP[46]可以在單細胞水平上測定細菌的胞內(nèi)pH
，但是還不能對植物上細菌的pH進行原位測定。隨著人們對鮮切果
蔬上細菌酸脅迫存活的日益關注，類似研究手段將被證明是非常必
要的。此外，在抗微生物研究中熒光探針結合流式細胞儀得到了1
‘泛的應用。熒光探針技術和顯微鏡技術已成功用在去污染劑對植
物上人和植物病原菌的定量影響研究中。
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