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本文標(biāo)題："食品微生物中的應(yīng)用-檢測(cè)細(xì)胞圖像顯微鏡"
新聞來源：未知 發(fā)布時(shí)間：2018-9-18 23:11:57 本站主頁地址：http://www.y7853.cn
食品微生物中的應(yīng)用-檢測(cè)細(xì)胞圖像顯微鏡
qPCR是在循環(huán)過程中，通過熒光探針檢測(cè)擴(kuò)增所得的基因產(chǎn)物的方法，可
在30～90 rain內(nèi)得出結(jié)果。有許多可用的熒光探針，例如SYBR Green I和
熒光能量共振轉(zhuǎn)移探針。這些探針可用來監(jiān)測(cè)反應(yīng)全過程并且省去了最終
產(chǎn)物的電泳。熒光能量共振轉(zhuǎn)移探針是與DNA單鏈互補(bǔ)的短鏈寡核苷酸[2¨
]。當(dāng)用這一方法檢測(cè)水和下水道樣品中的藍(lán)氏賈第蟲(以pgiardin基因?yàn)?/div>
目標(biāo))和小球隱孢子蟲(COWP基因?yàn)槟繕?biāo))時(shí)，檢出限前者為1個(gè)細(xì)胞，后者
為100個(gè)細(xì)胞。
采用SYBR Green工染料，在PCR循環(huán)的最后通過分析融解曲線而鑒定PC
R產(chǎn)物，因?yàn)镻CR產(chǎn)物有特定的融解溫度。針對(duì)不同組中的特定基因，這一
方法被用于同步檢測(cè)沙門氏菌和單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(L．monocytogen
es)。對(duì)29株沙門氏菌和18株單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(L．monocyto—gene
s)。經(jīng)過過夜?jié)饪s富集，這一方法可檢測(cè)到2．5個(gè)細(xì)胞的沙門氏菌血清型
和1個(gè)細(xì)胞的單核細(xì)胞增生李斯特氏菌(L．mo加cyzog鯽Ps)【¨嘲。qPCR技
術(shù)也被用于E．coli stxl和stx2基因的同步檢測(cè)㈣|。采用SYBR Green I熒
光染料的qPCR技術(shù)被用于檢測(cè)牡蠣組織勻漿和Gulf水域中的創(chuàng)傷弧菌，經(jīng)
過5 h的濃縮富集，這一方法可以檢測(cè)到一個(gè)細(xì)胞，如果不經(jīng)過濃縮富集，
可從1 g牡蠣組織勻漿或者10 mL Gulf水中檢測(cè)到102個(gè)細(xì)胞。該方法以專
一性的溶血毒素基因vvh為目標(biāo)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)完成時(shí)間不超過8 h。Lux熒光基
因
海洋細(xì)菌如費(fèi)氏弧菌(Vibrio JTscheri)和哈維氏弧菌(V harveyi)的
發(fā)射熒光是由基因控制的，并且發(fā)射熒光的能力可通過轉(zhuǎn)移某些控制基因
而使其他生物獲得。編碼熒光素的基因包括luxA和luxB，前者編碼熒光素
口亞基，后者編碼p亞基。該細(xì)菌編碼生物發(fā)光操縱子中的另外8個(gè)基因不
必轉(zhuǎn)移。熒光噬菌體在食品微生物中的應(yīng)用，一種噬菌體只對(duì)特定的目的
菌專一感染，因此在噬菌體和宿主之間具有高專一性聯(lián)系的優(yōu)點(diǎn)(見本章后
面噬菌體分類和第二十章噬菌體部分)。如果小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌(y．en
tero—colitica)是目標(biāo)菌，則特定的噬菌體只會(huì)對(duì)種內(nèi)的廣泛菌株專一感
染，而其他即使親緣關(guān)系很近的菌種也不會(huì)被感染。噬菌體的熒光基因是
通過重組方法插入的，大小約為2 kb。它本身由于缺少發(fā)光所需的成分，
因此本身并不發(fā)出熒光。當(dāng)被加入到其宿主菌中時(shí)，攜帶有熒光基因的噬
菌體進(jìn)入宿主并復(fù)制
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