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本文標(biāo)題："植物材料以樹(shù)脂為基質(zhì)樣品分析圖像顯微鏡"
新聞來(lái)源：未知 發(fā)布時(shí)間：2019-3-31 23:07:16 本站主頁(yè)地址：http://www.y7853.cn
植物材料以樹(shù)脂為基質(zhì)樣品分析圖像顯微鏡
Rogers(1994)和Yang等(1997b)已經(jīng)對(duì)來(lái)自于化石或者陳舊材料中DNA
的提取技術(shù)作了綜述。盡管他們的結(jié)論來(lái)自于動(dòng)物的軟組織或者硬組織材
料，但Yang等(1997b)的大體結(jié)論也適用于植物材料，即沒(méi)有一種提取方法
總是最好的。一般地講，一種以樹(shù)脂為基質(zhì)的提取方法，DNA吸附在硅膠上
，而蛋白類(lèi)、脂類(lèi)、多糖類(lèi)被洗掉，這樣可以產(chǎn)生較干凈的提取物，但產(chǎn)
率一般低于用去污劑／酶消化和乙醇沉淀的產(chǎn)率。另外，雖然沉淀法的產(chǎn)
率，特別是添加共沉淀時(shí)，DNA片段的長(zhǎng)度范圍大于用特定洗脫液和樹(shù)脂所
產(chǎn)生的DNA的片段，DNA片段的大小也影響硅膠提取或乙醇沉淀的產(chǎn)率。因
此，本章將詳細(xì)地描述我們經(jīng)常使用的以去污劑為基質(zhì)的沉淀提取方法，
對(duì)于其它的方法，作者可以參閱上面提到的文章或參考文獻(xiàn)，我也向讀者
建議去參考分子研究中心(Molecular ResearchCenter)的植物提取液和程
序(DNAzol ES)，這種方法對(duì)從某些材料中提取DNA的效果比較好，該方法
用于從老鼠糞便植物材料中提取DNA時(shí)，部分(但不是全部)效果很好(Golen
berg&Nizon，未發(fā)表)。
全部工作區(qū)域在提取之前必須用0．5％的次氯酸鈉溶液擦洗。化石材
料可以在0．5％的次氯酸鈉溶液中蘸一下進(jìn)行表面消毒，然后用蒸餾水徹
底浸洗。但是如果將要研究的是非細(xì)菌或真菌的特有基因，這種消毒并不
是絕對(duì)必須的。除去有機(jī)質(zhì)后，然后將樣本在提取緩沖液中研成粉末。最
好直接在一次性的小離心管內(nèi)用一次性的塑料碾槌(杵)直接磨碎組織以降
低外源污染或交叉污染，這可以手工操作或者在研杵上連接一個(gè)鉆孔機(jī)進(jìn)
行研磨。當(dāng)既不可能得到滅菌設(shè)備，并由于材料太硬又不可能用塑料研杵
研磨時(shí)，也可以用瓷制研缽和研杵，但必須按上述的方法用次氯酸鈉溶液
和UV進(jìn)行處理。提取液中包含2％CTAB，7．4MNaCI，20mMEDTA(pH 8．0)，
100mMTrisHCI(pH 8．0)，1％PVP(MW二40000)，4mMDEDTCA和5mMascorbica
cid(Bickel&Golenberg，未發(fā)表)。 這是改進(jìn)的Golenberg(1993)提取液
，其中加了兩種抗氧化劑：DEDTCA和Ascorbicacid。最終提取液的體積為0
．7mI，樣品在65℃溫育至少]小時(shí)。然后10000g離心10分鐘來(lái)沉淀固
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